高葉酸促進小鼠胚胎干細(xì)胞干性及分化潛能的作用機制研究.pdf

1、出生缺陷是一項影響廣泛的重要全球公共衛(wèi)生問題，同時在一些國家出生缺陷也是引起早期自然流產(chǎn)，終止妊娠，嬰幼兒致死和殘疾的主要原因。據(jù)報道，近70％的出生缺陷可以被預(yù)防，或者在良好的護理下治愈或改善。葉酸作為一種重要的微量元素，葉酸的補充在預(yù)防出生缺陷方面的作用已被公認(rèn)?；谝陨显?，許多國家開始將全人口的強制性的葉酸添加作為一項預(yù)防出生缺陷的公共衛(wèi)生政策加以實施。然而，葉酸與發(fā)育之間的確切關(guān)系尚未明確，尤其是不同個體的葉酸攝取能力差異巨大

2、，葉酸補充對出生缺陷的益處或葉酸過量所造成的危害也有待進一步澄清。
　　在本研究中，建立了不同葉酸飼料喂養(yǎng)小鼠的動物模型，發(fā)現(xiàn)，其子代小鼠肝臟組織中的干性標(biāo)記物分子的表達(dá)隨體內(nèi)葉酸水平的升高而增加。高葉酸攝入對子代小鼠干性標(biāo)志物的表達(dá)影響巨大。因此，進一步利用E14小鼠胚胎干細(xì)胞(mESCs)作為研究對象，檢測了不同葉酸濃度培養(yǎng)6個月mESCs的生物學(xué)特性、干性和多能性的改變。并成功建立了mESCs注射裸鼠皮下形成的畸胎瘤模型。通

3、過上述實驗發(fā)現(xiàn)，相對于常規(guī)培養(yǎng)的mESCs，葉酸的補充可增強其體外增殖，集落形成和干性相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)，并能在體內(nèi)良好的促進其多能性。在明確葉酸對于mESCs的相關(guān)作用的基礎(chǔ)上，進一步探索了補充葉酸促進mESCs增殖的機制。通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，對培養(yǎng)的細(xì)胞的差異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本進行分析，最終篩選并確認(rèn)一種在高葉酸水平下，mESCs中上調(diào)表達(dá)的重要的母源印記基因印記長非編碼RNA(lncRNA)Meg3（母系表達(dá)基因3，以下簡稱Meg3）。結(jié)

4、合重亞硫酸的測序發(fā)現(xiàn)，這種Meg3的上調(diào)是由啟動子的低甲基化所導(dǎo)致的，同時通過調(diào)控細(xì)胞中Meg3的表達(dá)可以回復(fù)葉酸補充的作用。通過進一步的篩選和機制研究，成功證實了Meg3和其靶蛋白LYAR(Cell growth-regulating nucleolar protein)的相互作用關(guān)系，結(jié)果顯示Meg3通過抑制LYAR的泛素化降解來穩(wěn)定LYAR，進而促進mESCs的干性和分化潛能。
　　綜上所述，認(rèn)為，母體高葉酸攝入可能對子代的