Ⅰ靶向抑制Notch1信號(hào)通路對(duì)人喉癌干細(xì)胞化療增敏的研究ⅡGP73調(diào)控的溶瘤腺病毒GD55對(duì)前列腺癌干細(xì)胞殺傷效果.pdf

1、喉鱗狀細(xì)胞癌，常發(fā)生于人體腫瘤中，發(fā)病率和病死率極高，嚴(yán)重危害著人類(lèi)健康。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)、分子醫(yī)學(xué)等技術(shù)的發(fā)展，與LSCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的許多靶點(diǎn)和信號(hào)通路(TP53、Notch信號(hào)通路等)被發(fā)現(xiàn)。在靶向LSCC特異的突變位點(diǎn)和信號(hào)通路的研究上，也取得了一定的治療效果?；熕幬镯樸K在減少喉癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、提高患者生存率、保護(hù)器官功能方面至關(guān)重要。靶向性或選擇性殺傷腫瘤干細(xì)胞，有望提高化放療敏感性，減少癌癥轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)。
　　本研究通過(guò)體外

2、懸浮培養(yǎng)類(lèi)喉癌干細(xì)胞，并利用分子克隆構(gòu)建載體pKC-Notch1和pLK0.1-shRNA載體，包裝慢病毒后感染喉癌細(xì)胞，然后篩選出Notch1信號(hào)沉默和Notch1信號(hào)過(guò)表達(dá)的喉癌細(xì)胞株Hep2Notch1+，Hep2Notch1-。用細(xì)胞計(jì)數(shù)法、Q-PCR、Weastern blot等實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)上述細(xì)胞相關(guān)因子的表達(dá)和細(xì)胞周期等生物學(xué)特性。MTT實(shí)驗(yàn)以及流式分析化療藥物順鉑對(duì)Hep2WT，Hep2Notch1+，Hep2Notch

3、1-的殺傷效果。運(yùn)用克隆形成實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)得到類(lèi)喉癌干細(xì)胞增殖能力弱，多處于靜息狀態(tài)G0-G1期。Q-PCR和RT-PCR結(jié)果顯示在類(lèi)喉癌干細(xì)胞中，CD44、ALDH、p-AKT、bcl2和p21表達(dá)顯著上調(diào)，而Notch1、bax和AKT下調(diào);進(jìn)一步運(yùn)用western blot方法證實(shí):在Hep2sphere細(xì)胞中p-AKT、bcl2和p21蛋白表達(dá)表達(dá)顯著上調(diào)，Bax和AKT蛋白表達(dá)下調(diào)。Notch1信號(hào)沉默后，細(xì)胞增殖速度加

4、快，AKT蛋白，促凋亡蛋白Bax下調(diào)，同時(shí)p21蛋白表達(dá)也減少。在用化療藥物順鉑處理后，細(xì)胞存活率相較野生型喉癌細(xì)胞更高。相反，Notch1信號(hào)過(guò)表達(dá)的喉癌細(xì)胞，細(xì)胞增殖速度明顯下降，促凋亡蛋白Bax表達(dá)增加，AKT蛋白和抑癌蛋白P21表達(dá)量也上升。在相同濃度DDP處理后，細(xì)胞存活率明顯低于Hep2WT，Hep2Notch1-細(xì)胞。結(jié)果說(shuō)明懸浮培養(yǎng)的類(lèi)喉癌干細(xì)胞具有喉癌干細(xì)胞特性。并且阿司匹林(Aspirin)和腺病毒ZD55-TRAI

5、L對(duì)類(lèi)喉癌干細(xì)胞具有較強(qiáng)殺傷效果而對(duì)分化的喉癌細(xì)胞影響較弱;DDP、DOX和5-Fu則相反。Noch1信號(hào)在喉癌細(xì)胞表現(xiàn)出抑制喉癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)Hep2細(xì)胞凋亡的特性，并且促進(jìn)p21信號(hào)表達(dá)，啟動(dòng)抑癌機(jī)制，使細(xì)胞更多地停留在G1期。同時(shí)，Notch1信號(hào)的過(guò)表達(dá)促進(jìn)了化療藥物順鉑對(duì)喉癌細(xì)胞的殺傷作用。而阻斷Notch1信號(hào)通路，會(huì)促進(jìn)喉癌細(xì)胞增殖，減少凋亡，并且增強(qiáng)喉癌細(xì)胞對(duì)DDP的耐藥性。由此可見(jiàn)，Notch1信號(hào)在喉癌中起抑癌作用。

6、前列腺癌已成為危害男性健康的最大問(wèn)題之一。與其他腫瘤相比，前列腺癌具有更明顯的腫瘤異質(zhì)性，從而很大程度影響了腫瘤的診斷、治療以及預(yù)后監(jiān)測(cè)。因此，對(duì)前列腺癌的研究治療變得尤為重要。溶瘤病毒能夠在不損傷正常細(xì)胞的情況下，特異性感染和裂解腫瘤細(xì)胞。隨著人們對(duì)基因和癌癥的深入研究，現(xiàn)代生物技術(shù)得道逐漸完善，治療癌癥的新型藥物和方法不斷更新，有些甚至已經(jīng)應(yīng)用于臨床研究。溶瘤病毒作為抗腫瘤藥物的關(guān)鍵在于提高其靶向性和溶瘤效應(yīng)。目前，開(kāi)發(fā)了一種新型的