黃芩苷對腦出血大鼠腦損傷保護機制研究.pdf

1、腦出血（intracerebrAlhemomhage ICH）是指腦實質(zhì)內(nèi)血管破裂性出血，是臨床常見的急癥，發(fā)病率高，死亡率高，尤其是重癥病人，30d內(nèi)死亡率高達30％～50％，預后極差[1]。中醫(yī)藥治療腦出血的臨床療效肯定，但缺乏科學性論證，且對其作用機理的研究甚少，使得中醫(yī)藥的研究與應(yīng)用很難與世界接軌，因此對其進行深入研究具有十分重要的意義。
　　 我室的前期實驗研究表明，黃芩苷能夠提高SOD活性,抵抗自由基的損害,降低MD

2、A含量，同時會抑制NOS活性，降低NO含量，抑制其產(chǎn)生的神經(jīng)毒性，并能提高腦內(nèi)抑制性氨基酸含量，降低興奮性氨基酸含量，進而達到保護腦組織的作用[2-3]。
　　 抑制性氨基酸GABA主要通過與三種特異性受體相互作用發(fā)揮其生理活性：GABAAR、GABABR和GABAcR[4]。其中GABAAR是哺乳類動物大腦中含量最多也是最重要的GABA受體[5]。GABA轉(zhuǎn)運體(GABA transporter，GAT)能夠快速攝取細胞外液和

3、突觸間隙的GABA，終止GABA對突觸后膜受體的作用，從而結(jié)束GABA的突觸傳遞過程[6]。研究發(fā)現(xiàn)，一些神經(jīng)退行性疾病，如帕金森氏癥，脊髓側(cè)索硬化癥，阿爾茨海默病等，以及一些神經(jīng)系統(tǒng)損傷，如外傷，缺血，出血等均存在Caspase-3參與的細胞凋亡過程，抑凋亡蛋白Bcl-2在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病過程中也具有重要作用[7-8]。
　　 研究方法和目的：
　　 本研究通過采用膠原酶+肝素鈉法誘導腦出血模型，按200m

4、g/kg劑量進行黃芩苷灌胃，于不同時間點，采用HE染色觀察大鼠腦組織神經(jīng)細胞形態(tài)學變化；采用免疫組化染色的方法觀察腦出血后腦內(nèi)的γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)運體GAT-1，γ-氨基丁酸受體GABAAR，促凋亡因子Caspase-3，抑凋亡蛋白Bcl-2的表達變化；利用流式細胞儀檢測了腦出血后腦內(nèi)神經(jīng)元的凋亡率，以及黃芩苷的作用。進一步探討了黃芩苷對大鼠腦出血后腦損傷的保護機制，為進一步了解腦出血疾病的發(fā)病機制及研制出血性腦損傷保護劑提供新的理論依據(jù)。

5、
　　 研究結(jié)果：
　　 1.大鼠腦出血模型的復制與其行為學及神經(jīng)形態(tài)學觀察：結(jié)果表明，腦出血后大鼠的行為以及腦組織神經(jīng)元有明顯的變化；黃芩苷給藥后，大鼠的行為明顯改善，在第三天基本恢復正常，腦出血狀況得到緩解，神經(jīng)元損傷也有明顯改善。
　　 2.腦組織內(nèi)的GAT-1和GABAAR表達的變化：免疫組化方法結(jié)果顯示，腦出血后12 h 腦內(nèi)GAT-1表達開始上調(diào)，24 h表達最高，72 h仍有一定強度表達，7 d后恢

6、復到正常水平；GABAAR的表達在12 h有所上調(diào)，24 h開始下降，72 h降到最低，7 d時恢復到正常水平。黃芩苷給藥后，各時間點的GAT-1陽性神經(jīng)元數(shù)目都有明顯下降；GABAAR陽性神經(jīng)元數(shù)目增多。
　　 3.腦出血后腦內(nèi)細胞凋亡的檢測：采用免疫組化方法檢測了腦組織內(nèi)的Caspase-3和Bcl-2表達變化。結(jié)果顯示，腦出血后1d大腦皮質(zhì)內(nèi)Caspase-3陽性細胞數(shù)目明顯增多，3 d呈現(xiàn)較強陽性表達，7 d開始下降；B

7、cl-2的表達在腦出血后1d沒有明顯變化，3 d達到開始增多，7 d達到高峰。黃芩苷給藥后Caspase-3陽性神經(jīng)元明顯減少；Bcl-2陽性細胞數(shù)量增加，反應(yīng)增強。采用流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率。結(jié)果顯示，模型組大鼠腦組織細胞凋亡率水平上升；黃芩苷給藥后，腦組織細胞凋亡率水平明顯降低。
　　 結(jié)論：
　　 研究結(jié)果表明，腦內(nèi)的GAT-1和GABAAR可能參與大鼠腦出血后神經(jīng)元損傷的病理生理過程，腦出血后神經(jīng)元的凋亡也