SHR大鼠肥厚左室心肌microRNA表達與室性心律失常關系的研究.pdf

1、microRNA(miRNA)是內(nèi)源性非編碼蛋白質(zhì)的單鏈小RNA，它通過調(diào)控基因表達來參與生命過程中的一系列重要進程。有研究表明miRNA可能與疾病發(fā)生有密切的關系，在不同類型疾病的發(fā)生過程中，miRNA的表達水平及其調(diào)節(jié)作用是不同的。已有研究發(fā)現(xiàn)miRNA與心肌肥厚、心律失常等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關。動物實驗研究表明，大鼠心肌梗死后miRNA-1的表達上調(diào)抑制心肌連接蛋白43(connexin43，Cx43)和內(nèi)向整流鉀通道2.

2、1(Kir2.1)的表達而引發(fā)室性心律失常(VA)。
　　 高血壓病是常見的心血管疾病，長期的血壓增高可導致左室肥厚(LVH)。已有臨床研究表明，高血壓病伴LVH患者VA的發(fā)生率可數(shù)倍增高，甚至可發(fā)生猝死。目前有關高血壓心肌肥厚發(fā)生VA的機制尚未完全闡明。因此，為了進一步闡明高血壓LVH者發(fā)生VA的分子機制，尋找新的VA治療靶點，本研究以SHR大鼠為研究對象，進行了以下三方面的系列研究。
　　 第一部分：SHR大鼠LVH

3、與VA誘發(fā)的實驗研究。
　　 17周齡的雄性SHR大鼠12只為LVH組，8周齡的雄性SHR大鼠12只為非LVH組，17周齡的雄性WKY大鼠12只為對照組。通過Langendorff灌注大鼠的離體心臟，觀察低鉀液灌注誘發(fā)VA的情況；組織病理學染色觀察離體心臟LVH情況。結果發(fā)現(xiàn)：1、HE染色結果顯示LVH組大鼠左心室心肌細胞明顯肥大，心肌間質(zhì)有不同程度增多。2、LVH組灌注低鉀液后出現(xiàn)VA時間明顯早于非LVH組和對照組(P＜0.0

4、1，P＜0.05)。3、LVH組的心律失常評分、VT發(fā)生率明顯高于非LVH組和對照組(P＜0.05)。
　　 第二部分：SHR大鼠肥厚左室心肌組織中miRNA表達的研究。本部分包括二個方面的研究：1、SHR大鼠肥厚左室心肌組織中miRNA差異表達研究。2、實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測SHR大鼠肥厚左室心肌組織miRNA-1表達。
　　 在SHR大鼠肥厚左室心肌組織中miRNA差異表達的研究中，10只16周齡雄性

5、SHR大鼠為LVH組，10只8周齡雄性SHR大鼠為對照組。左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)、組織病理學染色和測量心肌細胞橫徑(TDM)方法觀察LVH狀況；取左心室心肌組織常規(guī)抽提總RNA，應用含有924條探針的miRNA芯片檢測系統(tǒng)進行miRNA表達譜差異分析。結果發(fā)現(xiàn)：1、與對照組比較，LVH組和非LVH組的收縮壓和舒張壓明顯增高(P＜0.05，P＜0.01)。2、HE染色結果顯示LVH組大鼠左室心肌呈肥大表現(xiàn)，心肌間質(zhì)有不同程度增多；與對照

6、組比較，LVH組大鼠LVMI和CVF明顯增高(P＜0.05)。3、LVH組大鼠左室心肌組織miRNA表達譜中差異表達的miRNA共有13個，其中有4個miRNA上調(diào)，9個miRNA下調(diào)。
　　 在RT-PCR檢測SHR大鼠肥厚左室心肌組織miRNA-1表達的研究中，通過RT-PCR法定量檢測第二部分(研究一)大鼠心肌組織miRNA-1表達水平。結果發(fā)現(xiàn)：1、與對照組比較，LVH組左室心肌組織miRNA-1表達水平明顯升高為對照組

7、的2.08±0.21倍。2、SHR大鼠左室心肌組織miRNA-1表達水平與LVMI、CVF均呈正相關(分別r=0.712和0.674，均P＜0.05)。
　　 第三部分：miRNA-1對心肌組織Cx43、Kir2.1的調(diào)控作用研究。分為兩方面的研究：1、SHR大鼠肥厚左室心肌組織中Cx43、Kir2.1表達及其與miRNA-1相關性研究。2、干預SHR大鼠肥厚左室心肌組織中miRNA-1的表達對Cx43、Kir2.1蛋白表達水平

8、的影響。
　　 在SHR大鼠肥厚左室心肌組織中Cx43、Kir2.1表達及其與miRNA-1相關性研究中，取第二部分兩組大鼠心肌組織，用免疫組織化學和WesternBlot檢測心肌組織中Kir2.1和Cx43蛋白表達。結果發(fā)現(xiàn)：LVH組左室心肌組織Cx43、Kir2.1相對含量均明顯低于對照組(均P＜0.05)，并且與心肌組織miRNA-1表達水平均呈顯著負相關(均P＜0.05)。
　　 在干預SHR大鼠肥厚左室心肌組織

9、中miRNA-1的表達對Cx43、Kir2.1水平的影響研究中，選擇16只高血壓持續(xù)發(fā)展期并有LVH的17周齡SHR大鼠作為研究對象，隨機分為干預組6只，空白對照組和陰性對照組各5只。采用尾靜脈高壓注射脂質(zhì)體瞬時轉染miRNA-1抑制劑(Anti-mRNA-1)技術基因沉默miRNA-1。結果發(fā)現(xiàn)：1、與兩個對照組比較，干預組轉染Anti-miRNA-1后大鼠左室心肌組織miRNA-1表達水平明顯減少了(40±8％，P＜0.05)。2、

10、轉染Anti-miRNA-1基因沉默miRNA-1使干預組大鼠左室心肌組織Cx43、Kir2.1蛋白表達水平明顯高于陰性對照組和空白對照組(均P＜0.05)。
　　 本課題研究結果表明：1、伴有LVH的SHR大鼠心臟低鉀灌注液誘發(fā)VA幾率明顯增高，提示LVH與VA的發(fā)生密切相關。2、SHR大鼠肥厚的左室心肌組織miRNA的表達有明顯改變，提示miRNA可能參與SHR大鼠高血壓左室肥厚的發(fā)生發(fā)展。3、SHR肥厚左室大鼠心肌組織中m