不同膳食模式對NAFLD大鼠血清短鏈脂肪酸及肝臟炎癥因子的影響.pdf

1、研究目的：
　　基于高脂肪飲食誘導的NAFLD大鼠模型，再分別給予四種膳食飲食包括普通飼料、高脂肪飼料、高碳水化合物飼料和高蛋白質飼料，以分組研究。通過檢測不同膳食組大鼠血清短鏈脂肪酸（SCFA）和肝組織勻漿中促炎細胞因子 IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ水平及肝組織中腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信號通路的變化情況，從而探討膳食因素的改變對NAFLD發(fā)生發(fā)展的影響以及NAFLD發(fā)病相關機制。
　　研究方法：

2、r>　　將42只6周齡、體質量在140-180g區(qū)間的雄性潔凈級SD大鼠，通過一周時間的適應性喂養(yǎng)，隨機分成2個膳食組即對照組（12只）和模型組（30只），對照組采用普通飼料膳食飲食，模型組采用高脂肪飼料膳食飲食。8周后每組各隨機處死6只大鼠，并根據大鼠肝臟組織形態(tài)學和病理學結果及生化指標確定NAFLD大鼠模型的建立情況。NAFLD大鼠模型成功建立以后，隨機將模型組更換為四種膳食飲食，每組各6只大鼠，即包括普通膳食組、高脂膳食組、高糖膳

3、食組和高蛋白膳食組，高脂膳食組繼續(xù)用含高脂肪的飼料喂養(yǎng)，其余各組更換膳食飲食，即高蛋白膳食組采用高蛋白質飼料膳食飲食，高糖膳食組采用高碳水化合物飼料膳食飲食，普通膳食組采用普通飼料膳食飲食。于12周末處死大鼠。采用HE染色方法觀察大鼠鏡下肝組織結構的改變；運用生物化學的方法測量大鼠肝勻漿中低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、總膽固醇（TC）；運用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法檢測肝組

4、織勻漿白介素IL-6、IL-1β、IL-18、腫瘤壞死因子TNF-ɑ；氣相色譜法檢測血清短鏈脂肪酸（SCFA）；運用免疫組織化學（IHC）法測定大鼠肝臟組織中腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPKα）原位表達程度；采用實時熒光定量PCR（Real Time-PCR）法測定大鼠肝臟內乙酰輔酶A羧化酶（ACC）和羥甲基戊二酸單酰CoA還原酶（HMGR）mRNA轉錄水平。
　　結果：
　　1. NA

5、FLD大鼠模型建立結果
　　通過8周的高脂膳食，模型組大鼠的體質量、濕肝重及肝指數較同期對照組明顯增加；模型組肝臟組織勻漿中TC、TG、LDL-C含量較同期對照組明顯升高，HDL-C明顯降低；大鼠肝組織的形態(tài)學及 HE染色光鏡下觀察結果均表明模型組大鼠的肝組織脂質沉積增加；通過本實驗結果顯示8周的高脂膳食能夠引起肝細胞的脂肪變性，即高脂肪膳食成功誘導建立NAFLD大鼠模型。
　　2.膳食因素干預結果
　　1）肝臟組織形

6、態(tài)學和病理學結果
　　通過觀察大鼠肝臟組織的形態(tài)學表現(xiàn)發(fā)現(xiàn)對照組大鼠的肝臟組織為暗紅色，肝臟質地柔軟肝緣銳利，無明顯異常改變；普通膳食組大鼠肝臟組織體積稍變大，顏色比正常肝臟暗淡，肝臟表面粗顆粒感，肝邊沿略變鈍，質地尚柔軟；高脂膳食組、高蛋白膳食組和高糖膳食組大鼠肝臟體積明顯變大，呈現(xiàn)蒼白色，肝緣變鈍，表面能夠見到結節(jié)及灶狀改變。HE染色鏡下表現(xiàn)，對照組大鼠肝組織內小葉結構清楚分布整齊，胞質均勻，中心可見胞核；普通膳食組仍可見肝組

7、織小葉結構，部分肝組織細胞水腫，細胞內能夠看到少量的脂滴空泡，呈輕癥脂肪變；高脂膳食組、高蛋白膳食組和高糖膳食組肝組織小葉分布不清，界線與結構不清楚，胞質疏散，肝索結構混亂，肝臟細胞腫脹明顯，呈氣球樣改變，胞質中出現(xiàn)大小不一的脂滴，表現(xiàn)為中-重癥脂肪變。
　　2）肝臟組織生化指標檢測結果
　　與對照組對比,高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組大鼠肝臟組織勻漿中 TG，TC，LDL-C含量增加，HDL-C降低，差異

8、有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與普通膳食組相比較，高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組大鼠肝臟組織勻漿中TC，TG，LDL-C含量增加，HDL-C降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3）血清中SCFA水平
　　高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組與對照組比較，大鼠血清中總 SCFAs水平和乙酸鹽水平均增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），丙酸鹽和丁酸鹽水平無明顯差異；高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食

9、組與普通膳食組比較，大鼠血清中總 SCFAs水平和乙酸鹽水平均增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），丙酸鹽和丁酸鹽水平無明顯差異。
　　4）肝臟組織IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ濃度
　　與同期對照組對比,高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組肝組織勻漿IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ水平均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與同期普通膳食組相比，高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組

10、肝組織勻漿IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ水平均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　5）肝臟組織中AMPK-α2和p-AMPKα表達水平
　　高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組與同期對照組比較,大鼠肝臟組織中 AMPK-α2和 p-AMPKα表達水平均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組與同期普通膳食組比較，大鼠肝臟組織中 AMPK-α2和 p-AM

11、PKα表達水平均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　6）肝臟組織中ACC和HMGR mRNA轉錄水平
　　高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組與對照組相比,大鼠肝臟組織勻漿中 ACC及 HMGR mRNA轉錄水平均增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組與普通膳食組比較，大鼠肝臟組織勻漿中ACC及HMGR mRNA的轉錄水平均增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。<

12、br>　　結論：
　　1.通過8周的高脂膳食可以誘導形成NAFLD大鼠模型，表明長期的高脂膳食飲食能夠引起肝組織細胞脂質沉積，誘發(fā)肝細胞的脂肪變性。
　　2.高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組大鼠血清中乙酸鹽水平和總 SCFAs水平均升高，而丙酸鹽和丁酸鹽水平無明顯差異；提示SCFA可能對NAFLD發(fā)病產生一定影響，其中乙酸鹽可能對NAFLD的病理進展過程產生重要影響。
　　3.高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組大

13、鼠肝臟組織勻漿中促炎細胞因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ含量明顯增加，表明炎性細胞因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α促進了NAFLD肝臟組織的慢性低度炎性反應過程的發(fā)生發(fā)展。
　　4.高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組肝臟組織中AMPK-α2和p-AMPKα表達水平降低，而高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組肝組織勻漿中 ACC及HMGR mRNA的轉錄水平增高，提示AMPK活性及ACC和HMGR的