抑制口腔幽門螺桿菌的中藥組方的研制.pdf

1、研究背景:幽門螺桿菌(Helicobacter priori,H pylori)是一種有鞭毛的螺旋狀的革蘭染色陰性微需氧彎曲細菌。1983年澳大利亞學者Warren和Marshall首次從慢性活動性胃炎患者的胃竇黏膜活檢組織中分離出H.prlori。近二十年以來,H.pylori作為人類感染率最高的致病性細菌之一,引起學術界極大的關注。近年Krajden和Fcrguson分別從牙菌斑和唾液中分離和培養(yǎng)出H.pylori,口腔H.pylo

2、ri成為一大熱點。其研究內容包括:其一,使用PCR,分離培養(yǎng)法或尿素酶試驗法等多種方法從口腔牙菌斑、唾液、黏膜組織、嘔吐物中檢測到H.pylori。其二,研究顯示口腔H.pylori與多種口腔疾病的發(fā)生有關,包括復發(fā)性口腔潰瘍、口臭、牙周炎、齲病等。其三,患者口腔H.pylori與胃內H.pylori一致,兩者有互相傳播的可能。如Ferguson等通過可溶性蛋白電泳,DNA的限制性內切酶分析證實口腔H.pylori與胃內H.pylori

3、同源。其四,部分胃H.pylori再感染者與前次感染同源,其可能是胃內H.pylori根除后復發(fā)原因之一。如有國外學者研究發(fā)現1年后復發(fā)的患者經過隨機引物PCR證實與前次感染同源。其五,口腔健康狀態(tài)差或口腔中檢測到H.pylori的患者三聯療法H.pylori根除率低。其六,還有研究證實目前的三聯療法能夠清除胃內H.pylori,但不能清除口腔H.pylori。其可能與口腔牙菌斑特殊的“生物膜”有關。
　　 人類是H.pylor

4、i的自然傳染源,胃是H.priori最主要的寄居地,為學術界所公認。口腔H.pylori的分離和培養(yǎng)提示,口腔是H.pylori的另一聚集地。第一,H.pylori作為口腔眾多微生物中的一種,影響整個或局部口腔微生態(tài),可促進某些口腔疾病的發(fā)生和發(fā)展。第二,口腔H.pylori可能是胃內H.pylori感染和復發(fā)的重要因素,因而,抑制口腔H.pylori可使口腔和胃都有獲益。鑒于H.pylori對抗生素耐藥性的增加,以及口服抗生素對口腔H

5、.pylori清除效果不理想,使之清除口腔H.pylori不同于傳統的胃H.pylori根除的三聯療法。我國具有豐富的中醫(yī)藥資源,是人們生活醫(yī)療保健必不可少的一部分,中藥具有取材容易、價格便宜、毒副作用小、不易產生耐藥等優(yōu)勢,是新藥開發(fā)的重要原料。因此,本文試圖從多種以清熱解毒為主的常用中藥中篩選并組合成基礎配方,它具有較強抗H.pylori活性,起到抑菌消炎和維護口腔微生態(tài)平衡的作用；同時在中醫(yī)上具有止血、緩解疼痛等多種綜合功效,可防

6、治細菌引起的牙齦炎及由其發(fā)展的牙周疾病,為研制抑制口腔H.pylori的生長的口腔護理產品如牙膏、含片等提供理論基礎。再者,口腔局部使用配合三聯療法根除H.pylori,完善目前的防治方法,從而降低胃H.pylori的感染率及復發(fā)率。
　　 本課題由三部分實驗構成:第一部分,從在校大學生口腔分離培養(yǎng)H.pylori并分析其與牙齦炎的相關性,測試口腔H.pylori分離株對七種常用抗生素藥物敏感性。第二部分,測試50種中藥抗H.p

7、ylori標準株體外活性強度,并討論幾種具有強抗H.pylori活性中藥的藥性、歸經、功效等。第三部分,篩選一組具有強抗H.pylori活性的中藥組方,具有更強抗菌抗炎的作用,可局部用于口腔抑制H.pylori生長及口腔衛(wèi)生保健。
　　 第一部分:調查大學生口腔幽門螺桿菌與牙齦炎的相關性及其抗生素的藥物敏感性
　　 目的
　　 1.調查一般人群口腔H.pylori的感染率。
　　 2.分析口腔H.pylo

8、ri與牙齦炎的相關性。
　　 3.測試口腔H.pylori分離株對甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮、左氧氟沙星、慶大霉素和紅霉素等7種常用抗生素的耐藥性。
　　 方法
　　 1.研究人群:佛山科技學院的在校大學生,年齡18～25歲,均獲得知情同意。
　　 (1)問卷檢查排除以下:①吸煙；②系統性疾病,如糖尿病、出血性疾病、上呼吸道感染等；⑨近半年內接受過牙周治療、服用過抗生素或非甾體類抗炎藥；④明顯的

9、牙齒松動和嚴重的牙槽骨吸收、廣泛的齲壞、牙齒錯位。
　　 (2)一般口腔檢查:經過有經驗的臨床牙科醫(yī)生詢問患者主訴、病史、自覺癥狀,依據患者牙周袋探診深度(PD)、出血指數(SBI)和牙齦指數(GI)排除嚴重的牙周炎癥疾病,牙周炎也被排除。并且將所有受試者分為牙齦炎組和無牙齦炎組。
　　 2.標本采集:用無菌刮勺刮取患者兩側切牙、尖牙、前磨牙、磨牙的齦上、齦下菌斑,并收集1ml的唾液,充分混合。
　　 3.細菌接

10、種、分離、培養(yǎng)、傳代、鑒定和保存:于微需氧環(huán)境下在選擇性哥倫比亞固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。肉眼觀察菌落,挑取可疑菌落傳代培養(yǎng),涂片,革蘭染色,鏡下觀察菌體形態(tài),尿素酶試驗、觸酶試驗、氧化酶試驗等生化試驗鑒定。菌種保存于改良布氏肉湯甘油液體培養(yǎng)基。
　　 4.統計方法:應用分層分析卡方檢驗(SPSS13.0)分析牙齦炎與口腔H.pylori陽性率關系。
　　 5.抗生素敏感試驗:運用K-B紙片法測試臨床口腔H.pylori分離株對

11、7種常用抗生素藥物敏感性,用游標卡尺測量每種抗生素的抑菌環(huán)半徑,參照中國藥品生物制品鑒定所制訂的藥敏試驗判定標準判斷敏感、中度敏感和耐藥。
　　 結果
　　 1.總計356名在校大學生接受了此項調查,其中男生152名,女生204名。診斷表明,總患牙齦炎率為30.9％(110/356)。
　　 2.從受試者多個牙位的牙菌斑口腔唾液共獲取356份混合標本。分離培養(yǎng)、鑒定和保存了48(13.5％,48/356)株H.p

12、ylori菌株,患牙齦炎者H.pylori感染率為24.5％(27/110),未患牙齦炎者H.pylori感染率8.5％(21/246)?；佳例l炎者H.pylori感染率顯著高于未患牙齦炎者,x2=16.7,P=0.000(P<0.05)。
　　 3.男生組中,患牙齦炎者H.pylori感染率為20.8％(11/53),未患牙齦炎者H.pylori感染率為7.1％(7/99),患牙齦炎者H.pylori感染率顯著高于未患牙齦炎者

13、,x2=6.192,P=0.013(P<0.05)。
　　 4.女生組中,患牙齦炎者H.pylori感染率為28.1％(16/57),未患牙齦炎者H.pylori感染率為9.5％(14/147),患牙齦炎者H.pylori感染率顯著高于未患牙齦炎者,x2=11.263,P=0.001(P<0.05)。
　　 5.甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮、左氧氟沙星、慶大霉素和紅霉素的耐藥率分別是83.3％(40/48),33

14、.3％(16/48),14.6％(7/48),6.3％(3/48),29.2％(14/48),52.1％(25/48),27.1％(13/48)。
　　 結論
　　 1.口腔是H.pylori的儲存地,在特定的情況下,牙齦炎可能為H.pylori定植于口腔提供了更為適合的微環(huán)境,或者口腔H.pylori的定植可能為牙齦炎發(fā)生的促進因素之一。而兩者關系及作用機制尚需進一步研究。
　　 2.口腔H.pylori對甲硝

15、唑、克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮、左氧氟沙星、慶大霉素和紅霉素都有較高的耐藥性。
　　 第二部分:中藥體外抗幽門螺桿菌活性篩選測試
　　 目的:評估50種常用中草藥體外抗H.pylori活性,篩選出較強活性藥物,為進一步臨床應用抑殺H.pylori提供初步的理論依據。
　　 方法:用布氏肉湯倍比稀釋法,測試50種中藥水煎液物體外抗H.pylori悉尼標準株活性,用最小抑菌濃度(MIC)評估活性大小。
　　

16、 結果:多種中藥水煎液具有較強的體外抗H.pylori活性,其中黃連、黃芩、板藍根三種水煎液抗H.pylori活性最強,最小抑菌濃度均為7.8mg/ml。
　　 結論:黃連、黃芩、板藍根三種中藥價格便宜,毒性低,副作用小,不易產生耐藥性,有可能為新藥的合成提供潛在原材料。
　　 第三部分:篩選抑制口腔幽門螺桿菌生長的中藥組方
　　 目的:擬研制一種抗口腔H.pylori的中藥基礎方,可長期局部用于口腔,抑制口腔H

17、.pylori生長和繁殖,維持口腔微生態(tài)環(huán)境平衡,保持口腔健康。
　　 方法:以中藥抗H.pylori最小抑菌濃度為基礎,選三種具有強抗H.pylori活性的中藥,并檢測此三種中藥對口腔分離株的MIC50、MIC75和MIC90,以三種藥物作為三個因素,藥物不同濃度為三個水平,采用正交設計法,進行9輪試驗測定三種藥物混合液的對口腔分離株抑菌率。
　　 結果:黃芩、金銀花、蒲公英三種中藥具有強體外抗H.pylori活性,中