內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在高血壓大鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用研究.pdf

1、目的：研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在高血壓模型大鼠缺血再灌注損傷中的作用，并探討其作用與血壓水平的關(guān)系。
　　方法：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃橐韵聝蓚€(gè)部分：第一，整體實(shí)驗(yàn)，對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠施行心肌缺血再灌注損傷，觀察高血壓和（或）心肌缺血再灌注損傷下心功能的變化；第二，采用病理學(xué)和分子生物學(xué)等方法探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在高血壓和（或）心肌缺血再灌注損傷中的作用。使用自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)作為疾病

2、模型動(dòng)物，隨機(jī)分為4組，即(1)假手術(shù)組（Shame組）、(2)缺血再灌注對(duì)照組（IR組）、(3)心肌缺血再灌注+高血壓治療藥物（卡托普利）組（IR+Captopril組）、(4)假手術(shù)+高血壓治療藥物（卡托普利）組（Shame+Captopril組），每組8只。其中第一組和第四組分別為高血壓和非高血壓情況下假手術(shù)對(duì)照組；第二組為高血壓情況下心肌缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)組，第三組為非高血壓情況下心肌缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)組。使用10％水合氯醛，按

3、照400mg/kg體重進(jìn)行麻醉，結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支30分鐘，再灌注90-120分鐘建立心肌缺血再灌注損傷模型，實(shí)驗(yàn)期間使用無(wú)創(chuàng)血壓儀（BP-98A）監(jiān)測(cè)動(dòng)物血壓及心率，120分鐘后處死動(dòng)物，開(kāi)胸取材。4%甲醛灌注后取心肌缺血區(qū)組織，石蠟包埋，切片、HE染色、鏡檢；選取缺血區(qū)組織提取蛋白質(zhì)和mRNA，備用。采用免疫組化的研究方法，觀察各組大鼠心肌缺血區(qū)組織中CHOP通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，考察合并高血壓影響后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否加劇，所選取

4、的檢測(cè)蛋白為CHOP通路中的GRP78和CHOP。最后，根據(jù)病理結(jié)果中CHOP通路相關(guān)蛋的表達(dá)的變化，通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PERK、P-PERK、eIF2α、P-eIF2α、ATF2這五個(gè)指標(biāo)，繼而探討心肌缺血再灌是否通過(guò)PERK-eIF2α-ATF2通路激活CHOP的表達(dá)，同時(shí)考察合并高血壓的作用下，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的誘發(fā)通路是否發(fā)生變化。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠術(shù)前體重、血壓和心率無(wú)明顯差異（P＞0.05

5、），給藥后的(3)、（4）組與未給藥的（1）、（2）組大鼠相比，血壓都有顯著下降（P＜0.05）。
　　2. HE染色后，觀察發(fā)現(xiàn)(2)、(3)組中心肌組織都有明顯壞死損傷。
　　3.免疫組化實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于CHOP指標(biāo)，（1）組和（3）組間有差異（P＜0.05），（3）組和（4）組間有差異（P＜0.05），其他各組之間無(wú)差異性（P＞0.05）；對(duì)于GRP78指標(biāo)，（1）組和（2）組間有差異（P＜0.05），（3）組和（4）組間

6、有差異（P＜0.05），其他各組之間無(wú)差異性（P＞0.05）。
　　4. Western Blot實(shí)驗(yàn)中，四個(gè)組的5項(xiàng)指標(biāo)均有表達(dá)，雖然由于取樣和老鼠個(gè)體差異，同一組之間的平行性不是十分良好，但是可以明確觀測(cè)到指標(biāo)蛋白的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組中5個(gè)指標(biāo)蛋白總體水平上表達(dá)要高于對(duì)照組，表明心肌缺血再灌注通過(guò)PERK-eIF2α-ATF2通路激活CHOP的表達(dá)，而高血壓對(duì)于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的誘發(fā)通路并沒(méi)有產(chǎn)生明顯變化。
　　結(jié)論：
　　1

7、.高血壓治療藥物卡托普利可以有效地降低自發(fā)性高血壓大鼠的血壓，使得高血壓大鼠的血壓恢復(fù)到正常范圍內(nèi)。
　　2.通過(guò)病理切片和HE染色可以觀察到心肌缺血再灌注可以引起心肌組織的壞死損傷。
　　3.通過(guò)免疫組化實(shí)驗(yàn)，對(duì)于CHOP通路中的兩個(gè)指標(biāo)，假手術(shù)對(duì)照組和心肌缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)組存在差異（P＜0.05），而(2)缺血再灌注對(duì)照組（IR組）和(3)心肌缺血再灌注+高血壓治療藥物（卡托普利）組（IR+Captopril組）之間沒(méi)

8、有體現(xiàn)出差異（P＞0.05），表明心肌缺血再灌注損傷后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激加劇，并激發(fā)了CHOP通路；而高血壓與否并沒(méi)有加劇內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。
　　4.通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)，每個(gè)組內(nèi)的樣本平行性不好，這可能與取樣操作和老鼠的個(gè)體差異有關(guān)。(2)缺血再灌注對(duì)照組（IR組）、(3)心肌缺血再灌注+高血壓治療藥物（卡托普利）組（IR+Captopril組）中5個(gè)指標(biāo)蛋白總體水平上表達(dá)要高于（1）假手術(shù)對(duì)照組、（4）假手術(shù)+高血壓治療藥物（卡