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文檔簡介
1、目的:檢測MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-3及Col-II細胞外基質(zhì)因子在兔關(guān)節(jié)軟骨細胞劃傷后不同時間點的表達變化。
方法:從成年的新西蘭大白兔的膝關(guān)節(jié)股骨下端關(guān)節(jié)面分離出關(guān)節(jié)軟骨組織,進行原代六孔板培養(yǎng)。待細胞長出基本完全融合時,將培養(yǎng)的細胞分成4組。分別為正常組,損傷后1、3、7天組。第1組不做任何處理,留作正常對照;第2至4組細胞使用無菌10μl槍頭在六孔板中呈“#”字劃傷,在劃痕過程中,力度與速度一致,其
2、中,間距為0.5 cm。采用實時PCR檢測1、3、7和0天時間點基質(zhì)金屬蛋白酶-2、3和9,基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物-3及II型膠原相對表達水平。
結(jié)果:成功獲取軟骨,經(jīng)原代培養(yǎng)后成功建立損傷細胞模型。MMP-2 mRNA表達水平在損傷后1,3,7天均比正常組升高,其中第7天最高(P<0.05)。MMP-3 mRNA表達水平在細胞損傷后第1,3,7天均比正常組明顯下降,第7天最低(P<0.05)。 MMP-9 mRNA表達水平在損
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