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文檔簡(jiǎn)介
1、既往研究發(fā)現(xiàn)青藤堿可通過(guò)對(duì)樹突狀細(xì)胞(DC)上TLRs的調(diào)節(jié),影響相應(yīng)炎癥因子釋放,對(duì)實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎模型動(dòng)物關(guān)節(jié)的病理改變有改善作用。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種多因素介導(dǎo)的自身免疫性疾病,T細(xì)胞的異?;罨赗A發(fā)病中起到了十分重要的作用。T細(xì)胞通過(guò)TCR識(shí)別抗原呈遞細(xì)胞(APC)提呈的抗原肽-MHC分子復(fù)合物而被激活,分泌炎性細(xì)胞因子活化巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞。作為一個(gè)專職的APC,刺激和調(diào)控T細(xì)胞的活化是樹突狀細(xì)胞的主要功能?;诖?,本課
2、題進(jìn)一步研究青藤堿對(duì)DC成熟度及其相關(guān)細(xì)胞因子的探討,為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
目的:通過(guò)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)RA小鼠骨髓來(lái)源的樹突狀細(xì)胞(BMDC),觀察其不同生長(zhǎng)階段生物學(xué)形態(tài)及刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力;探索不同濃度的青藤堿體外作用于DC細(xì)胞,觀察其生物學(xué)活性變化、DC表面標(biāo)志物CD80、CD86、CD11c及炎性因子IL-6、IL-12、INF-γ的改變,為青藤堿抗RA的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:SPF級(jí)ba
3、l/c小鼠,依據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行改良后建立膠原誘導(dǎo)型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型(CIA),造模成功后脫頸處死小鼠,按文獻(xiàn)改良后進(jìn)行骨髓來(lái)源的DC培養(yǎng),第5天時(shí)加入脂多糖(LPS)刺激DC成熟,在第六天時(shí)采用流式細(xì)胞直接免疫熒光標(biāo)記法對(duì)所得的細(xì)胞檢測(cè)CD11c,CD86的表達(dá)情況以鑒定DC細(xì)胞。將培養(yǎng)成熟的DC細(xì)胞分為空白組、模型組、青藤堿高、中、低劑量組、甲氨蝶呤組,各組給予不同濃度青藤堿干預(yù)24小時(shí)后,運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD80、CD86、CD11c
4、的表達(dá)情況,并將細(xì)胞培養(yǎng)上清液采用elisa法檢測(cè)其IL-6、IL-12、INF-γ的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
結(jié)果:1.牛Ⅱ型膠原聯(lián)合完全弗氏佐劑對(duì)小鼠進(jìn)行尾根部、腹部及足墊部注射,在35天左右誘導(dǎo)出RA模型;
2.IL-4及GM-CSF在第5天左右能夠誘導(dǎo)骨髓源細(xì)胞轉(zhuǎn)化為DC且DC在培養(yǎng)過(guò)程中常常處于集落狀態(tài);
3.模型組DC表面CD80、CD86的表達(dá)明顯高于空白組,提
5、示RA造模過(guò)程中可能影響DC細(xì)胞表面協(xié)同刺激分子(CD80、CD86)的表達(dá);
4.青藤堿干預(yù)后可下調(diào)DC細(xì)胞表面CD80、CD86的表達(dá),提示其可抑制DC細(xì)胞的成熟;
5.青藤堿可降低DC細(xì)胞分泌IL-6、IL-12、IFN-γ等炎性因子,減少炎癥免疫應(yīng)答。
結(jié)論:青藤堿通過(guò)降低DC細(xì)胞表面CD80、CD86的表達(dá)而抑制其成熟,從而抑制其抗原呈遞作用,抑制DC細(xì)胞分泌相關(guān)炎性因子,影響T細(xì)胞的活化,抑制其
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