針灸治療潰瘍性結腸炎小鼠模型的染色質重塑表觀遺傳調控機制.pdf

1、目的：
　　研究針灸對葡聚糖硫酸鈉（Dextran Sulfate Sodium Salt，DSS）誘導的潰瘍性結腸炎（Ulcerative Colitis，UC）小鼠模型的療效及染色質重塑因子的影響，探討針灸治療UC小鼠模型的染色質重塑表觀遺傳調控機制。
　　方法：
　　以DSS誘導造成小鼠UC模型，給予電針和艾灸“關元”和“足三里”治療。觀察小鼠一般情況、糞便隱血、疾病活動評分（Disease Activity I

2、ndex，DAI）、腸道病理結構和超微結構等療效指標；以RT2 PCR ARRAY的方法檢測染色質重塑因子表達的變化；并利用Co-expression Network基因網(wǎng)絡構建方法構建不同狀態(tài)的基因調控網(wǎng)絡，借助String網(wǎng)絡平臺，構建差異基因蛋白調控網(wǎng)絡。
　　結果：
　　1．針灸治療UC模型小鼠的療效指標分析：
　?。?）UC模型小鼠較正常小鼠一般情況差，可見肉眼血便，DAI評分明顯增高；電針和艾灸治療后，一般

3、狀況明顯好轉，血便情況明顯改善，DAI評分均明顯下降，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而電針和艾灸組之間DAI評分無統(tǒng)計學差異。
　　(2)光鏡觀察結果：模型組與空白組比較，具有明顯變化，表現(xiàn)為結腸黏膜中、重度水腫，充血明顯，腺體結構被破壞，杯狀細胞增多，有潰瘍面及壞死灶，大量炎性細胞浸潤；電針組和艾灸組，腺體破壞較模型組輕，黏膜下層輕度水腫，炎細胞浸潤量少，與模型組相比，更接近空白組，而兩治療組之間無明顯差別。
　　(3)

4、透射電鏡觀察結果：與空白組比較，模型組細胞核染色聚集，染色質分布不均勻，細胞內(nèi)空泡增多，線粒體腫脹，粗面內(nèi)質網(wǎng)擴張，微絨毛稀疏，上皮細胞間隙明顯增寬；電針組及艾灸組與模型組相比更接近空白組，細胞核染色少量聚集，胞漿內(nèi)線粒體輕度腫脹，粗面內(nèi)質網(wǎng)稍微擴張，微絨毛基本正常，上皮細胞比較正常，兩組之間細胞微結構無明顯差異。
　　2．針灸治療UC小鼠染色質重塑因子表達的變化：
　?。?）模型組與正常組相比：Brdt、Cdyl2、Phc

5、1表達升高；Cbx2、Cbx3、Cbx4、Cbx5、Mbd4、Phf21b表達下調；電針組與模型組相比：Baz2a、Baz2b、Brd3、Brdt、Brwd1、Cbx1、Cbx2、Cbx3、Cbx4、Cbx6、Cbx7、Cbx8、Chd2、Chd3、Chd5、Chd7、Ing2、Ing4、Ing5、Mbd4、Nab2、Pcgf2、Pcgf3、Pcgf6、Phf1、Phf21b、Phf5a、Smarca2、Spen表達升高；Smarca4

6、表達下調。艾灸組與模型組相比：Cbx2、Cbx3、Cbx4、Cbx6、Cbx7、Cbx8、Chd6、Ing5、Mbd4、Nab2、Pcgf2、Pcgf6、Phf2、Phf21b表達升高；Cdyl表達下調。
　?。?）DSS誘導UC小鼠模型，PcG家族、BMD家族、CHD家族和MBD家族的染色質重塑因子參與了表觀遺傳調控；電針通過對PcG家族、BMD家族、CHD家族、ING家族、MBD家族、NuRD家族和SWI/SNF家族染色質重塑

7、因子的影響，艾灸通過對PcG家族、CHD家族、ING家族、MBD家族、NuRD家族染色質重塑因子的影響，進行表觀遺傳調控。
　　3．針灸治療UC小鼠染色質重塑表觀遺傳學調控網(wǎng)絡構建結果：
　?。?）成功構建正常組、模型組、電針組和艾灸組小鼠的染色質重塑因子基因調控網(wǎng)絡。空白組基因調控網(wǎng)絡較緊密和復雜，模型組的網(wǎng)絡顯得較為單一。電針組和艾灸組的基因調控網(wǎng)絡與空白組較為接近，網(wǎng)絡關系趨于豐富，電針組尤甚。模型組關鍵基因為Cbx5

8、、Cbx6、Cbx3，電針組關鍵基因為Pcgf1、Brpf1、Ing5、Chd6、Nsd1、Phf6、Ctbp1、Pcgf5、Brd4、Asxl1，艾灸組關鍵基因為Phc2、Suz12、Brd2、Brwd1、Asxl1。
　?。?）成功構建了模型組、電針組、艾灸組染色質重塑差異基因蛋白網(wǎng)絡。模型組Rnf2蛋白起關鍵作用，主要圍繞PcG家族展開；電針組Smarca2蛋白起關鍵作用，圍繞SWI/SNF家族和PcG家族展開；艾灸組Rnf

9、2、Phc2等蛋白起關鍵作用，圍繞PcG家族展開。
　　結論:
　　1．電針和艾灸治療的UC小鼠的染色質重塑過程中具有共同的和不同的因子參與調控。
　　2．電針和艾灸干預后，其染色質重塑因子的基因調控網(wǎng)絡接近空白對照組，呈現(xiàn)豐富的、復雜的、緊密的調控效果。
　　3．從差異基因蛋白網(wǎng)絡調控來看，PcG家族可能是DSS誘導UC小鼠染色質重塑的關鍵；電針和艾灸都通過對PcG家族的影響，從而影響到染色質的重塑，達到治療效