復(fù)方降脂膠囊抗動(dòng)脈粥樣硬化作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的：通過復(fù)方降脂膠囊(CLLC)對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化鵪鶉和大鼠影響;通過體外細(xì)胞培養(yǎng),觀察CLLC含藥血清對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷人體臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用,探討其治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用及可能的作用機(jī)制。
　　 方法：體內(nèi)研究:(1)采用高脂飼養(yǎng)法(膽固醇1.5％,基礎(chǔ)飼料78.5％,花生油4％,豬油16％)復(fù)制鵪鶉高脂血癥模型,并誘發(fā)動(dòng)物的動(dòng)脈粥樣硬化模型(AS),分為模型組(NS)、陽性組(洛伐他汀7.48mg/kg)、CLL

2、C高(40.00g生藥/kg,相當(dāng)于臨床人用量30倍,下同)、中(26.67g生藥/kg,相當(dāng)于臨床人用量20倍,下同)、低(13.33g/kg相當(dāng)于臨床人用量10倍,下同)5組,每天灌胃給藥一次,同時(shí)給予高脂飼料,另設(shè)空白對(duì)照組(NS),予普通飼料飼養(yǎng)。連續(xù)給藥12周,分別于第4周、第12周測(cè)定血清中總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)的

3、含量。并于第12周對(duì)主動(dòng)脈及左、右頭臂干動(dòng)脈進(jìn)行肉眼觀察和光鏡下組織學(xué)檢查,計(jì)算其肝臟指數(shù);測(cè)定血液中NO、NOS、AngII、cGMP、TXB2、ET、6-keto-PGF1a、MMP-1、MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN;做血漿中循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞(CEC)計(jì)數(shù),測(cè)定血清中CD40、CD40L、TGF-β、sVCAM、sICAM的含量。(2)SD大鼠40只,雌雄各半,予高脂飲食(4％膽固醇,0.5％膽酸鈉,0.2％丙基硫氧嘧啶,1

4、0％豬油和85.3％基礎(chǔ)飼料)、右側(cè)頸總動(dòng)脈損傷、維生素D3肌肉注射復(fù)制大鼠AS模型,按體重隨機(jī)分為模型組(NS)、陽性組(洛伐他汀7.48mg/kg)、CLLC高(40.00g/kg)、中(26.67g/kg)、低(13.33g/kg),另取8只正常大鼠作為空白組(NS),予普通飼料飼養(yǎng),每天灌胃一次,12周后取血及右側(cè)頸總動(dòng)脈標(biāo)本,檢測(cè)全血黏度及血漿粘度、血液中血脂及t-PA、PAI、IL-6、IL-8、TNF-a含量,并作病理組織

5、切片,光鏡下觀察動(dòng)脈壁變化情況。(3)選取雄性SD大鼠,按體重隨機(jī)分為空白組(NS)、陽性組(曲克蘆丁48mg/kg)、CLLC高(40.00g/kg)、中(26.67g/kg)、低(13.33g/kg)劑量組。采用電刺激損傷大鼠頸動(dòng)脈復(fù)制混合血栓模型,觀察CLLC對(duì)血栓形成的影響。選用KM小鼠,按體重隨機(jī)分為空白組(NS)、陽性組(曲克蘆丁48mg/kg)、CLLC高(40.00g/kg)、中(26.67g/kg)、低(13.33g/

6、kg)劑量組。采用ADP混合致栓劑致小鼠急性肺栓塞模型,觀察CLLC對(duì)血栓形成的影響。體外研究:(1)大鼠每日灌胃1次(CLLC40.00g/kg),連續(xù)7天,末次給藥1.5h后制備實(shí)驗(yàn)血清。(2)通過H202誘導(dǎo)損傷人體臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,采用MTT法來觀察CLLC含藥血清不同濃度對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)損傷模型的保護(hù)作用;試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中SOD、MDA、NO、NOS、MMP-2、MMP-9、EMMPRIN、TGF-β、

7、CD40和CD40L,的含量。
　　 結(jié)果：體內(nèi)研究:(1)CLLC能夠明顯降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中脂質(zhì)的含量,降低其AS斑塊的發(fā)生率;經(jīng)CLLC干預(yù)治療后,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中AngII、TXB2、ET、MMP-1、MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN的含量降低,而NO、NOS、cGMP、6-keto-PGF1a、TGF-β的含量則升高,與模型組比較有顯著性差異,可明顯降低血液中CEC的數(shù)量,減少血清中CD40、CD40L、sVCAM

8、-1及sICAM-1的含量,與模型組對(duì)比有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。(2)經(jīng)CLLC干預(yù)治療后,可降低實(shí)驗(yàn)大鼠的全血粘度,減少血液中TG、TC、LDL-C、PAI、IL-6、TNF-a的含量,升高血液中HDL-C、IL-10的含量,并減少動(dòng)脈管壁斑塊的生成,降低內(nèi)膜中泡沫細(xì)胞與脂質(zhì)的沉積,減少AS斑塊中巨噬細(xì)胞數(shù)量:能顯著延長(zhǎng)電流損傷大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜血栓形成的時(shí)間;對(duì)小鼠急性肺血栓有抑制作用,能縮短ADP混合致栓劑致肺栓塞

9、模型小鼠的喘促持續(xù)時(shí)間(與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異P＜0.05或P＜0.01)。體外研究:CLLC含藥血清能提高H202誘導(dǎo)損傷人體臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞活性,降低細(xì)胞上清液中MDA、MMP-2、EMMPRIN、TGF-β、CD40和CD40L的含量,提高細(xì)胞上清液中SOD的含量。
　　 結(jié)論：CLLC可明顯降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中脂質(zhì)的含量,減少其AS斑塊的發(fā)生率,其作用可能與減少血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷、保護(hù)血管內(nèi)皮功能、抑制AS斑塊