Cocktail探針藥物法評價溫腎咳喘片對CYP450酶的影響及其配伍的代謝組學(xué)研究.pdf

1、目的：溫腎咳喘片是由厚樸、蛇床子、甘草提取物組成的中藥新藥，具有溫腎納氣、止咳、平喘之功效，主要用于腎不納氣、肺氣上逆的咳嗽、哮喘等病證的治療。方中厚樸酚、和厚樸酚、蛇床子素、歐前胡素及甘草酸為主要有效成分。據(jù)記載：蛇床子有小毒，但其毒性研究并不深入，毒性作用機制不清；組方中甘草具有解毒、調(diào)和藥性等廣泛的功效，因此對蛇床子及甘草做進一步的研究，有助于闡明溫腎咳喘片組方的配伍機制，為本藥的開發(fā)和臨床的合理應(yīng)用提供一定的實驗依據(jù)。
　

2、　 方法：采用體外方法，以香豆素、右美沙芬、氯唑沙宗三種探針藥物作為Cocktail 探針，并結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對各探針藥物的原型及其代謝物進行分離、分析，分別探討甘草酸及甘草素對CYP450酶系不同亞型的影響；同時選用SD大鼠，對溫腎咳喘片的配伍機制進行研究，實驗分為：空白對照組、厚樸組、蛇床子組、甘草組、厚樸+甘草組、蛇床子+甘草組、厚樸+蛇床子組、溫腎咳喘片全方組，并以四氯化碳組作為毒性陽性對照，連續(xù)給藥13天，測定肝功能指標（A

3、ST、AIT、ALP、TBI），觀察各組大鼠肝臟病理變化；并收集空白對照組、蛇床子給藥前和給藥后第4、7、10、13天及大鼠尿液，通過超高效液相色譜/四極桿串聯(lián)高分辨飛行時間質(zhì)譜（UPLC/Q-TOF MS）對尿液進行檢測，以SIMCA-P 12.0軟件進行代謝組學(xué)分析，尋找蛇床子引起體內(nèi)變化的生物標記物。
　　 結(jié)果：體外Cocktail 探針實驗結(jié)果表明：甘草酸能夠有效抑制CYP 2A6、CYP 2E1的活性；甘草素對CYP

4、 2A6 具有誘導(dǎo)作用，而對CYP 2D6和CYP 2E1則有抑制作用。反映肝功能的血清指標顯示：單獨給予大鼠厚樸或蛇床子提取物后AST、ALP 顯著升高，而經(jīng)甘草配伍后AST、ALP水平與空白對照組無顯著性差異；當厚樸和蛇床子合用時毒性有一定的協(xié)同作用，AST、ALP、TBI 三項指標均顯著升高，而配伍甘草后的全方組三項指標均無顯著性差異；肝臟病理組織學(xué)觀察表明：空白對照組、甘草組、厚樸+甘草組、全方組均未見明顯異常，厚樸組有3例出現(xiàn)

5、局部肝細胞嗜酸性變性，蛇床子組有5例出現(xiàn)散在的肝細胞嗜酸性變性，且在血管周圍出現(xiàn)少量炎性細胞浸潤，蛇床子+甘草組有2例出現(xiàn)散在少量肝細胞嗜酸性變性，厚樸+蛇床子組有6例出現(xiàn)散在肝細胞嗜酸性變性，且匯管區(qū)結(jié)締組織增生，四氯化碳組病變最為明顯，8例均出現(xiàn)不同程度的肝細胞腫脹，散在肝細胞嗜酸性變性，肝小葉周邊肝細胞脂肪變性，匯管區(qū)輕度纖維組織增生；代謝組學(xué)研究結(jié)果顯示：蛇床子給藥組與空白對照組大鼠尿液代謝物譜圖存在明顯差異，兩組大鼠尿液間代謝

6、物指紋圖譜研究分類良好，并發(fā)現(xiàn)了磷酰膽堿等6個可能的生物標記物。
　　 結(jié)論：甘草的主要成分甘草酸及甘草素對CYP 2A6、CYP 2D6、CYP 2E1的活性具有一定的影響，而甘草提取物是溫腎咳喘片的主要成分之一，提示溫腎咳喘片在與經(jīng)CYP 2A6、CYP 2D6、CYP 2E1代謝的藥物合用時需要引起注意，避免不良反應(yīng)的發(fā)生。血清生化及肝臟病理組織學(xué)觀察顯示，厚樸和蛇床子的毒性在與甘草配伍后能夠顯著降低，在一定程度上說明了溫