姜類中藥抑制腫瘤細胞生長及誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡作用實驗研究.pdf

1、背景:隨著中醫(yī)學(xué)對于癌癥治療的深入探索,中醫(yī)藥在提高腫瘤患者生存質(zhì)量和延長生存時間等方面得到廣泛的運用,中西醫(yī)結(jié)合療法在癌癥治療領(lǐng)域被眾醫(yī)家所肯定。近年來,許多臨床及實驗研究顯示,姜類中藥干姜、炮姜、姜黃、高良姜等在抑制腫瘤病的進展、減輕放化療毒副作用等方面作用具有明顯優(yōu)勢。
　　 目的:本課題旨在研究姜類中藥干姜、炮姜、姜黃、高良姜對胃癌SGC-7901細胞、肺癌A549細胞的體外抗癌作用以及對抗癌機制進行初探,為臨床辨病辨證

2、合理有效使用姜類中藥提供一定實驗及理論依據(jù)。
　　 方法:采用MTT,3H-TdR摻入法觀察姜類中藥干姜、炮姜、姜黃、高良姜煎劑以及姜類中藥含藥血清對胃癌SGC一7901細胞、肺癌A549細胞的體外生長抑制作用。在體外抑瘤實驗的基礎(chǔ)上,采用AnnexinV-FITC/PI雙染法觀察姜類中藥血清誘導(dǎo)胃癌SGC一7901細胞、肺癌A549細胞凋亡作用,PI單染法觀察姜類中藥血清對肺癌A549細胞周期調(diào)節(jié)作用。
　　 結(jié)果:(

3、1)姜類中藥煎劑(干姜、炮姜、姜黃、高良姜)對肺癌A549細胞均具有一定的增殖抑制作用,干姜、炮姜、姜黃的抑制作用隨劑量的加大而逐漸增強,均具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異,提示它們對A549細胞的增殖抑制作用呈濃度依賴性。(2)高良姜從10mg/ml到40mg/ml濃度對A549生長的抑制作用都接近100％,無明顯濃度依賴性。(3)炮姜、高良姜在10mg/ml濃度下對A549抑制作用有統(tǒng)計學(xué)意義,其他藥物在10mg/ml濃度下抑制率無統(tǒng)計學(xué)意義,姜

4、黃在達到40mg/ml劑量后對A549的抑制作用有統(tǒng)計學(xué)意義。(4)四藥中干姜的濃度依賴性最明顯,隨劑量上升,對A549細胞抑制作用加強明顯并超過炮姜,有統(tǒng)計學(xué)意義。(5)姜類中藥對A549的體外抑制作用強弱順序為在10mg/ml濃度下:高良姜＞炮姜＞干姜＞姜黃;在40mg/ml濃度下:高良姜＞干姜＞炮姜＞姜黃。(6)姜類中藥煎劑對胃癌SGC-7901細胞均具有一定的抑制增殖作用,干姜、炮姜、高良姜抑制作用隨劑量的加大而逐漸增強,均具有

5、顯著統(tǒng)計學(xué)差異,提示它們對胃癌SGC-7901細胞具有增殖抑制作用,其抑制作用呈濃度依賴性。(7)姜黃對SGC-7901的抑制作用濃度依賴性無統(tǒng)計學(xué)意義。(8)高良姜在低濃度下(10mg/ml),對胃癌SGC-7901細胞的抑制作用即迅速增強,到達平臺期(大于90％)。(9)在本實驗中,千姜、炮姜對胃癌SGC-7901細胞的抑制作用:炮姜＞干姜,且有統(tǒng)計學(xué)意義。(10)姜類中藥對SGC-7901的體外抑制作用強弱順序為:在20mg/ml

6、濃度下高良姜＞炮姜＞姜黃＞干姜,在40mg/ml濃度下高良姜＞炮姜、干姜＞姜黃。(11)姜類中藥含藥血清對肺癌A549細胞生有增殖抑制作用,其中以15％血清協(xié)同抑制作用最佳,此時抑制作用大小表現(xiàn)為炮姜＞姜黃＞高良姜＞干姜。(12)姜類中藥血清對胃癌SGC-7901細胞有增殖抑制作用,其中以15％血清濃度協(xié)同抑制作用最佳,此時抑制作用表現(xiàn)為干姜＞炮姜＞高良姜＞姜黃。(13)通過AnnexinV-FITC/PI雙染色法檢測,姜類中藥血清可誘

7、導(dǎo)A549細胞凋亡,同時伴有細胞的壞死.干姜組誘導(dǎo)細胞凋亡作用最佳,其他各組差異不明顯。(14)通過PI單染色法檢測姜類中藥血清干預(yù)肺癌A549細胞周期,各組藥物血清顯示出不同程度的G2/M期阻滯,其中以干姜組較高,炮姜組顯示出一定程度G0/G1期阻滯。(15)通過AnnexinV-FITC/PI雙染色法檢測胃癌SC-C-7901細胞凋亡,姜類中藥作用48h可誘導(dǎo)胃癌SGC-7901細胞凋亡,同時伴有細胞的壞死.姜黃組誘導(dǎo)細胞凋亡作用最

8、佳,其他各組差干姜＞炮姜＞高良姜。
　　 結(jié)論:(1)姜類中藥煎劑抑制腫瘤細胞體外生長實驗顯示:姜類中藥(干姜、炮姜、姜黃、高良姜)均有抑制肺癌A549細胞、胃癌SGC-7901細胞增殖作用,對于不同細胞,其抑制作用強弱有不同特點。在10mg/ml濃度下,炮姜對于肺癌、胃癌細胞的抑制作用均大于干姜,干姜的抑制作用有明顯的濃度依賴性,隨濃度上升抑制作用顯著增強,對于肺癌,在40mg/ml濃度下干姜優(yōu)于炮姜。姜黃較其他實驗藥物對腫瘤

9、細胞的增殖抑制作用弱,在40mg/ml濃度下對于腫瘤細胞增殖抑制作用有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。高良姜在極小劑量(小于10mg/ml濃度)時即對肺癌A549細胞、胃癌SGC-7901細胞的增殖即有抑制作用,并迅速上升到平臺期(抑制率＞90％)。(2)姜類中藥血清抑制腫瘤細胞生長實驗顯示:姜類中藥經(jīng)體內(nèi)代謝吸收后制備血清對細胞的抑制作用與生藥制劑不完全相同。在本實驗中,姜類中藥血清總體評價以15％血清培養(yǎng)條件對腫瘤細胞增殖抑制作用最佳。(3)在15

10、％血清培養(yǎng)條件下,相當(dāng)于20g/日/人造模新西蘭兔的姜類中藥血清對肺癌細胞A549抑制作用:炮姜＞姜黃＞高良姜＞干姜;對胃癌細胞SGC-7901抑制作用:干姜＞炮姜＞高良姜＞姜黃。(4)在姜類中藥血清誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡實驗顯示,姜類中藥具有明顯的誘導(dǎo)肺癌胃癌細胞凋亡作用。干姜對肺癌誘導(dǎo)凋亡作用大于其他藥物,姜黃對胃癌誘導(dǎo)凋亡作用大于其他藥物。姜類中藥干預(yù)細胞周期實驗顯示,姜類中藥抑制腫瘤細胞生長與姜類中藥含藥血清對腫瘤細胞周期G2/M期和