多元摻雜納米羥基磷灰石粉體體外細胞毒性的相關研究.pdf

1、背景：
　　羥基磷灰石具有與人體骨組織和牙齒礦物質相似的化學組成和晶體結構，而被用作硬組織植入材料。雖然羥基磷灰石有著諸多的優(yōu)點和良好的應用前景，但是其同樣存在著生物學活性不足和不易降解等缺點，從而限制了其臨床應用。研究發(fā)現人體骨組織磷灰石中除了含有鈣和磷之外，還含有大量的微量元素。目前，通過水熱法可以合成多元素摻雜的納米羥基磷灰石粉體。但多元素摻雜是否會對納米羥基磷灰石粉體的毒性產生影響尚不明確。本研究將對這一問題展開研究。

2、r>　　目的：
　　研究多元摻雜對納米羥基磷灰石粉體體外細胞毒性的影響及相關機制;研究多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液體外細胞毒性及相關機制;初步探索多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對牙髓細胞的影響為繼續(xù)探索臨床應用以及深入研究硬組織植入材料多元摻雜納米羥基磷灰石涂層的制備和生物學效應提供一定的理論依據。
　　方法：
　　第一部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體體外細胞毒性及相關機制。
　　1.以CCK-8比色法研究多元摻

3、雜納米羥基磷灰石粉體對L929細胞增殖的影響;
　　2.以AnnexinV-PI雙染法經流式細胞儀檢測、以Hochest33342-PI雙染法經熒光顯微鏡檢測細胞凋亡;
　　3.以ROS熒光探針標記經熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測活性氧;
　　4.以JC-1熒光探針標記經流式細胞儀檢測線粒體膜電位變化;
　　5.以Western-Bolt法檢測相關蛋白的表達。
　　第二部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液體外

4、細胞毒性及相關機制。
　　1.以完全培養(yǎng)液制備多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液;
　　2.以CCK-8比色法研究多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液對L929細胞增殖的影響;
　　3.以Annexin V-PI雙染法經流式細胞儀檢測細胞凋亡;
　　4.以Western-Bolt法檢測相關蛋白的表達。
　　第三部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對牙髓細胞的影響。
　　1.人牙髓原代細胞的培養(yǎng);
　　2.

5、以CCK-8比色法研究多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對人牙髓細胞增殖的影響。
　　結果：
　　第一部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體體外細胞毒性及相關機制。
　　多元摻雜納米羥基磷灰石粉體與非摻雜粉體均可以抑制L929細胞增殖，促進細胞凋亡，并誘導L929細胞產生ROS和線粒體膜電位降低，同時促進p53蛋白表達，刺激Caspase3蛋白活化。另外，通過細胞凋亡檢測多元摻雜納米羥基磷灰石粉體具有較高的凋亡率，且ROS水平和線粒

6、體膜電位降低的比例也較高。通過細胞增殖檢測結果可知雖然多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對于L929細胞增殖的抑制作用更強，但兩者之間差異沒有統(tǒng)計學意義(p=0.9716)。
　　第二部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液體外細胞毒性及相關機制。
　　多元摻雜納米羥基磷灰石粉體與非摻雜粉體浸提液均可以抑制L929細胞增殖，促進凋亡，同時促進p53蛋白表達，刺激Caspase3蛋白活化;通過細胞增殖檢測結果可知，兩者之間差異沒有統(tǒng)計學

7、意義(p=0.9728)。
　　第三部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對牙髓細胞的影響。
　　多元摻雜納米羥基磷灰石粉體與非摻雜粉體與目前臨床常用的兩種氫氧化鈣蓋髓材料（Calcimol LC、氫氧化鈣根管消毒材料）對人牙髓細胞的增殖均無明顯影響，各處理組與對照組OD值相比差異均沒有統(tǒng)計學意義;且兩種納米羥基磷灰石材料之間的差異同樣沒有統(tǒng)計學意義(p=0.9411)。
　　結論：
　　1.多元摻雜納米羥基磷灰石粉體