豬流行性腹瀉病毒S1蛋白親和肽的篩選與鑒定.pdf

1、豬流行性腹瀉(PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的一種豬的急性、高度接觸性腸道傳染病。自1978年報(bào)道以來在歐洲以及亞洲許多國家相繼爆發(fā),給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大損失,因此對(duì)于PED的診斷以及疫苗的研究就顯得尤為重要。PEDV纖突糖蛋白(S)是位于病毒粒子表面的結(jié)構(gòu)蛋白,它既含有介導(dǎo)病毒侵入宿主細(xì)胞的受體結(jié)合域,又擁有介導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生病毒中和抗體的抗原表位,具有良好的免疫原性。
　　 利用生物學(xué)軟件對(duì)PEDVS基因進(jìn)行了抗原位點(diǎn)分

2、析,在不破壞線性抗原位點(diǎn)的前提下將S基因進(jìn)行分割獲得S基因的片段命名為S1。本試驗(yàn)在高效表達(dá)PEDVS1蛋白后,利用噬菌體展示技術(shù)篩選并鑒定了能與PEDVS1蛋白相互作用的多肽分子,為進(jìn)行PED的快速診斷以及開發(fā)有效的新型疫苗奠定了基礎(chǔ)。
　　 本試驗(yàn)成功構(gòu)建了編碼PEDVS1蛋白的pET30a-S1原核重組表達(dá)質(zhì)粒,并在E.ColiRosetta中進(jìn)行原核表達(dá)。將制備并純化的重組蛋白進(jìn)行復(fù)性和活性檢測,結(jié)果表明這種融合蛋白具有

3、一定的生物學(xué)活性。以重組蛋白為免疫原免疫新西蘭白兔制備了多克隆抗體。免疫熒光實(shí)驗(yàn)以及病毒抑制實(shí)驗(yàn)證明此多克隆抗體具有良好的生物學(xué)活性。
　　 利用噬菌體隨機(jī)十二肽庫,以PEDVS1重組蛋白為靶分子,對(duì)其進(jìn)行了四輪生物淘選。對(duì)第四輪洗脫物隨機(jī)淘選出的10個(gè)噬菌體單克隆的核苷酸序列進(jìn)行測定,并進(jìn)行多肽序列的推導(dǎo),結(jié)果表明,經(jīng)過對(duì)靶分子的四輪篩選后,最終篩選出三個(gè)具有高度同源性的多肽,序列分別是MPAVMSSAQVPR,NL,SNRL