康柏西普對(duì)兔穿透性角膜移植術(shù)后角膜新生血管的影響.pdf

1、目的：
　　我國現(xiàn)有角膜盲患者約300萬人，且每年以10-20萬的速度增長(zhǎng)。角膜移植術(shù)是治療角膜盲患者的最有效方法，術(shù)后角膜新生血管生長(zhǎng)仍是角膜移植手術(shù)失敗的主要因素。目前臨床上主要使用糖皮質(zhì)激素類藥物控制角膜移植術(shù)后角膜新生血管的生長(zhǎng)。糖皮質(zhì)激素類藥物的治療效果確鑿，但容易引起激素性青光眼、并發(fā)性白內(nèi)障等眼部并發(fā)癥。因此尋找一種既能有效控制角膜移植術(shù)后角膜新生血管的生長(zhǎng)又很少引起眼部并發(fā)癥的安全、高效的抗新生血管藥物顯得尤為重要

2、。
　　康柏西普是一種由我國自發(fā)研制的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）藥物，它已被廣泛使用于眼底新生血管的治療，國內(nèi)外尚無用于治療角膜移植術(shù)后新生血管的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過觀察康柏西普對(duì)兔穿透性角膜移植術(shù)（penetrating keratoplasty, PKP）術(shù)后的影響進(jìn)一步探索其在兔PKP術(shù)后新生血管生長(zhǎng)方面的治療作用。
　　眾所

3、周知，在血管化組織中應(yīng)用血管生長(zhǎng)抑制劑將影響組織創(chuàng)傷愈合過程。因此，康柏西普控制角膜新生血管生長(zhǎng)同時(shí)是否會(huì)阻礙角膜傷口的愈合是本實(shí)驗(yàn)需要關(guān)注的重要問題。角膜傷口的愈合過程中，靜態(tài)的角膜基質(zhì)細(xì)胞被激活轉(zhuǎn)化為角膜成纖維細(xì)胞，損傷修復(fù)過程中部分角膜成纖維細(xì)胞形態(tài)功能進(jìn)一步改變轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞。肌成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞有相同特征，具有收縮性，可以促進(jìn)損傷愈合。α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）是肌成纖

4、維細(xì)胞的特異性細(xì)胞標(biāo)記物，它的測(cè)定能夠反應(yīng)角膜中肌成纖維細(xì)胞的水平，進(jìn)而推測(cè)角膜傷口的愈合程度。
　　本實(shí)驗(yàn)旨在通過測(cè)定VEGF的表達(dá)，初步探明康柏西普對(duì)兔PKP術(shù)后角膜新生血管的抑制作用；觀察α-SMA的變化推測(cè)角膜傷口修復(fù)過程以及康柏西普對(duì)傷口愈合的影響，從而指導(dǎo)人PKP術(shù)后新生血管的治療。
　　方法：
　　1分組：將48只新西蘭大白兔隨機(jī)分為4組，每組12只。分別為：對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組和實(shí)驗(yàn)3組。對(duì)照組：

5、常規(guī)點(diǎn)眼，即兔PKP造模后妥布霉素滴眼液點(diǎn)術(shù)眼4/日；實(shí)驗(yàn)1組：常規(guī)點(diǎn)眼，同時(shí)加用0.01％康柏西普點(diǎn)術(shù)眼4/日；實(shí)驗(yàn)2組：常規(guī)點(diǎn)眼，同時(shí)加用0.1％康柏西普點(diǎn)術(shù)眼4/日；實(shí)驗(yàn)3組：常規(guī)點(diǎn)眼，同時(shí)開始0.1％康柏西普0.1ml結(jié)膜下注射1/周。
　　2制備兔PKP模型：7.5mm環(huán)鉆制備植片；7.25mm環(huán)鉆鉆切，15°前房穿刺刀鉆痕處穿刺，角膜剪剪下角膜片制成植床；10-0尼龍線先于12:00、6:00、9:00、3:00各縫合

6、1針，再于每象限加縫2針，縫合植片。48只兔右眼均按照以上步驟制備PKP模型。
　　3實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real time-polymerase chain reaction, qPCR）術(shù)后第2周、4周、6周、8周各時(shí)間點(diǎn)每組處死3只兔，取材后采用qPCR方法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)角膜VEGF和α-SMA的表達(dá)情況。
　　4統(tǒng)計(jì)：應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1 VEGF的表達(dá)：對(duì)照

7、組和各個(gè)實(shí)驗(yàn)組VEGF的表達(dá)均隨時(shí)間推移而先增加后減少，且第4周時(shí) VEGF的表達(dá)量最高；所有時(shí)間點(diǎn)各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，VEGF表達(dá)均降低且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組比較，各時(shí)間點(diǎn)VEGF表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），實(shí)驗(yàn)3組所有時(shí)間點(diǎn)VEGF表達(dá)較實(shí)驗(yàn)2組低，降低程度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　2α-SMA的表達(dá)：隨時(shí)間進(jìn)展，所有組α-SMA表達(dá)均呈上升趨勢(shì)，所有組內(nèi)任意時(shí)間點(diǎn)兩兩比較均有

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；所有實(shí)驗(yàn)組4個(gè)時(shí)間點(diǎn)α-SMA表達(dá)均低于對(duì)照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組比較，實(shí)驗(yàn)2組和實(shí)驗(yàn)3組比較，各時(shí)間點(diǎn)α-SMA表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1康柏西普可以抑制兔穿透性角膜移植術(shù)后角膜新生血管的生成。
　　2康柏西普在抑制兔穿透性角膜移植術(shù)后角膜新生血管生成的同時(shí)不影響角膜傷口的愈合。
　　3不同給藥濃度對(duì)兔穿透性角膜移植術(shù)后