抗肝癌和肺癌細(xì)胞活性物質(zhì)的篩選及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：用MTT法對各種中藥樣品進(jìn)行抗人肝癌HEPG2細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞活性篩選，并進(jìn)行活性追蹤，篩選出活性較強(qiáng)的物質(zhì)，然后對其相關(guān)的抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)行初步探究，從而對抗腫瘤藥物的研發(fā)提供可能的先導(dǎo)化合物和相關(guān)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：通過MTT法用不同濃度的順鉑(20、40、60、80、100mg/mL)對人肝癌HEPG2細(xì)胞、人肺癌A549細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測，算出不同濃度對應(yīng)的抑制率，從而獲得一個(gè)最合適的細(xì)胞毒性篩選濃度;以

2、順鉑為參照，在發(fā)現(xiàn)香加皮(XJP)和人參(RSY)提取物對這兩種細(xì)胞有抑制作用的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)對分離純化XJP和RSY獲得的系列樣品進(jìn)行活性追蹤，最終選出了兩種抗腫瘤活性較強(qiáng)的單體物質(zhì)(XJP-12、RSY-28);確定它們的結(jié)構(gòu)。用Hoechst染色法進(jìn)行檢測XJP-12和RSY-28對HEPG2細(xì)胞和A549細(xì)胞的凋亡情況;采用Human TNF-α Elisa試劑盒和Caspase-8活性檢測試劑盒檢測XJP-12和RSY-28對H

3、EPG2和A549細(xì)胞中的TNF-α含量和Caspase-8活性。
　　結(jié)果：不同濃度的順鉑對人肝癌HEPG2細(xì)胞和A549細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用，對HEPG2和A549細(xì)胞的IC50分別為（15.81±1.24）mg/mL、(24.67±2.12)mg/mL，當(dāng)順鉑濃度為60mg/mL時(shí)，對兩種細(xì)胞的抑制率均達(dá)到了75％以上，以此濃度作為后續(xù)樣品篩選的初篩濃度;經(jīng)過活性追蹤，發(fā)現(xiàn)XJP-12、RSY-11、RSY-28對HE

4、PG2;XJP-12、RSY-25、RSY-28、RSY-30對A549細(xì)胞具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。其中XJP-12、RSY-28為單體物質(zhì)。它們分別是杠柳苷F和人參皂苷Rk1，其結(jié)構(gòu)式分別為：將其IC50折算為摩爾濃度后，杠柳苷F和人參皂苷Rk1對HEPG2細(xì)胞的IC50分別為13.5mM和12.1mM;對A549細(xì)胞的IC50分別為18.7mM和13.9mM，而同時(shí)兩次實(shí)驗(yàn)測得的順鉑的IC50分別為52.6mM和82.2mM。通過Ho

5、echst染色發(fā)現(xiàn)XJP-12和RSY-28均能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，且凋亡情況跟兩種藥物濃度相關(guān);而且XJP-12和RSY-28均能增加細(xì)胞內(nèi)TNF-α含量和提高Caspase-8酶活性，并存在一定的劑量關(guān)系。
　　結(jié)論：順鉑能有效的抑制HEPG2和A549細(xì)胞的增殖，且存在一定的劑量關(guān)系，可作為本次篩選的陽性對照。從香加皮和人參中篩選獲得了兩個(gè)對這兩種細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用的化合物杠柳苷F和人參皂苷Rk1。這兩個(gè)化合物對這兩種腫瘤細(xì)胞的細(xì)