NK細胞受體與宿主MHC Ⅰ類分子匹配程度對骨髓移植后造血重建的影響.pdf

1、自然殺傷細胞(natural killer cell，NK細胞)是機體天然免疫細胞，可以清除體內變異細胞，包括惡性病變和被病原體感染的細胞，可直接識別機體內的正常和異常細胞，進而對機體內的異常信號做出快速反應。
　　一般認為，NK細胞通過其細胞表面的NK細胞受體來區(qū)分正常和異常細胞。NK細胞表面表達NK細胞免疫球蛋白受體(注釋:killer cell immunoglobulin-likereceptor，KIR)，能特異性識別并

2、結合其他細胞表面的主要組織相容性復合體（注釋:major histocompatibility complex，MHC）Ⅰ類分子。KIR分為抑制型和活化型兩種，分別向細胞內傳遞抑制性信號和活化性信號，共同調節(jié)NK細胞的殺傷活性。目前公認的理論為“Missing Self”機制:機體的正常細胞表達大量的MHCⅠ類分子，他們與NK細胞表面的抑制型KIR結合，抑制NK細胞活性;在某些癌變或者病毒感染細胞MHCⅠ類分子表達減少時，不能有效抑制N

3、K細胞的殺傷功能，導致其被活化的NK細胞清除。
　　在臨床中骨髓移植(注釋:bone marrow transplantation，BMT)是治療血液系統(tǒng)中良惡性疾病的有效手段。有研究得出來源于供者的NK細胞可以清除受者體內的白血病細胞。本課題組前期研究表明，NK細胞可以減少移植物抗宿主病的發(fā)生，同時因為NK細胞的生物學效應往往依賴于其受體與配體的識別及匹配程度，故該效應與自然殺傷細胞KIR和受者MHCⅠ類分子匹配程度有關。

4、>　　本研究重點關注NK細胞KIR與MHCⅠ類分子的匹配程度對骨髓移植后造血重建的影響研究。NK細胞作為稀有淋巴細胞亞群，在外周血和脾臟中含量極少，想要獲得足夠治療用量的NK細胞，需要對其進行分離純化和體外擴增培養(yǎng)。本研究中使用密度梯度離心和免疫磁珠(MACS)兩種NK細胞分選技術，和使用血小板裂解液(platelet lysate，PL)對NK細胞進行體外擴增培養(yǎng)的方法，獲得了大量高純度的NK細胞。
　　為了進一步研究allo-

5、NK細胞在骨髓移植中的作用，擬采用動物模型來觀察allo-NK細胞受體與宿主MHCⅠ類分子的匹配程度對骨髓移植后移植物植入的影響和機制。進行該研究首先要建立骨髓移植模型，移植前的預處理是供體植入的必要條件，不同的預處理強度對骨髓移植預后具有顯著影響。
　　本研究中選用全身輻照（注釋:total body irradiation，TBI）進行預處理，利用3Gy和6Gy不同強度60Coγ射線全身照射BALB/c和CB6F1雌性小鼠，制

6、備成清髓和非清髓兩種模型，然后通過尾靜脈輸入供者C57BL/6J雄性小鼠的骨髓細胞，通過觀察受者的生存期、嵌合率等情況，確定骨髓移植動物模型的最佳預處理強度。研究結果6Gy預處理的對照組小鼠在觀察期內全部死亡，進行骨髓移植后的實驗組小鼠生存率在90％以上，并且6Gy預處理的骨髓移植小鼠外周血中的白細胞和血小板水平適宜進行造血重建的觀察。
　　為了觀察供鼠NK細胞受體與受鼠MHCⅠ類分子匹配程度對骨髓移植小鼠造血重建的影響。分離了3

7、0只C57BL/c小鼠的骨髓細胞和NK細胞，輸給經(jīng)過預處理的BALB/c和CB6F1小鼠，受鼠被分為單純輻照組、輸入骨髓細胞組和輸入骨髓細胞及NK細胞組三組，6只/組，觀察不同時間點血常規(guī)、生存時間、病理組織學等指標變化，進行組間比較。結果顯示:輸入骨髓細胞、骨髓細胞及NK細胞組小鼠均長期存活，也未見GVHD病理學改變。移植后第14天時，輸入骨髓細胞組和輸入骨髓細胞及NK細胞組的BALB/c小鼠(MHCⅠ類分子完全不相合)外周血白細胞計

8、數(shù)分別為:(1.35±0.33)×109/L和(1.80±0.18)×109/L，兩組之間具有顯著性差異，血小板計數(shù)分別為:(79±19)×109/L和(117±13)×109/L，兩組之間具有顯著性差異;輸入骨髓細胞組和輸入骨髓細胞及NK細胞組的CB6F1小鼠（MHCⅠ類分子半相合）外周血白細胞計數(shù)分別為:(1.52±0.26)×109/L和(1.85±0.34)×109/L，兩組之間差異無統(tǒng)計學意義，血小板計數(shù)分別為(90±12)×