微小RNA-9在心肌纖維化中的作用及其相關機制的研究.pdf

1、研究背景和目的：心肌纖維化是許多心血管疾病的終末期共同表現，是以心肌成纖維細胞的過度增殖及I型、III型膠原蛋白等細胞外基質的過量沉積為特征。目前抑制心肌纖維化的主要方法是使用 RAAS系統(tǒng)抑制劑如 ACEI和 ARB類藥物等。MiRNA是真核細胞內一類具有負性調控作用的小RNA，通過與其靶基因的特異性結合，抑制基因的表達。MiRNA參與了真核生物基因表達的幾乎全部過程，越來越多的研究表明miRNA在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要

2、作用。本研究主要探討微小RNA-9（miRNA-9，miR-9）在心肌纖維化中的作用及其相關機制。
　　方法：PDGF-BB（20 ng/ml、50 ng/ml）或血清(10％)處理大鼠新生心肌成纖維細胞48小時，采用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測各組大鼠心肌成纖維細胞中 miRNA-9的表達量。MiRNA-9、miRNA-9+ miRNA-9抑制劑（anti-miR9）分別轉染大鼠心肌成纖維細胞，采用噻唑藍

3、細胞增殖活性檢測法（MTT）、qRT-PCR、蛋白免疫印跡法（Western blotting）分別檢測各組大鼠心肌成纖維細胞增殖率、血小板衍生生長因子受體-β（PDGFR-β）及 I型、III型膠原蛋白（collagen I、collagen III）表達量。PDGFR-β過表達質粒、PDGFR-β過表達質粒+ miRNA-9分別轉染大鼠心肌成纖維細胞，檢測各組 PDGFR-β及collagen I、collagen III表達量。S

4、iPDGFR-β轉染大鼠心臟心肌成纖維細胞，檢測PDGFR-β及collagen I、collagen III表達量。PDGFR-β雙熒光素酶報告基因質粒+ miRNA-9轉染大鼠心肌成纖維細胞，檢測熒光素酶活性。
　　結果：PDGF-BB或血清處理大鼠心肌成纖維細胞48小時后，miRNA-9表達量較對照組明顯下調（P<0.05）。MiRNA-9組細胞增殖率。PDGFR-β、collagen I、collagen III mRNA

5、及蛋白表達量較對照組均明顯下調（P<0.05）。miR-9+miRNA-9抑制劑組上述指標較對照組變化無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。PDGFR-β過表達質粒組 PDGFR-β及 collagen I、collagen III mRNA較對照組明顯上調（P<0.05），較PDGFR-β過表達質粒+miRNA-9組變化無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。SiPDGFR-β組PDGFR-β、collagen I、collagen III mRNA及