雷帕霉素對幼年期皮質發(fā)育畸形大鼠腦發(fā)育的保護作用.pdf

1、目的：探討mTOR信號通路與X射線照射孕鼠后誘導的皮質發(fā)育畸形(malformation of cortical development，MCD)大鼠模型之間的相關性，以及其抑制劑雷帕霉素對MCD大鼠腦發(fā)育的保護作用及其可能機制。
　　方法：1、將懷孕后SD大鼠隨機分為正常組、模型組、溶劑組及雷帕霉素組，并于懷孕第16天開始連續(xù)每天既定時間按以上分組分別給予不同的相應預處理。其中，模型組、溶劑組及雷帕霉素組大鼠于懷孕第17天時使用

2、195cGy劑量X射線照射孕鼠。然后待上述懷孕母鼠自然生產，其生產的第一代仔鼠（F1代）成為此次的實驗對象，即為建立的MCD大鼠動物模型。2、隨后每組子一代鼠分別于出生后當天、第一天、第二天、第三天、第十天（即P0、P1、P2、P3、P10）共5個時間點每天分別隨機選取18只實驗幼鼠，隨即斷頭取出腦組織。3、每組每個時間點將其中6只腦組織立即予以4％多聚甲醛PBS液固定，固定完全后使用游標卡尺測量每只腦組織前后徑、上下徑、左右徑大小并記

3、錄，根據測量結果分析腦組織體積大小的差異，隨后將上述腦組織按一定比例進行病理切片，最后行HE染色及Nissl染色分析腦組織病理改變。4、將每組每個時間點剩下12只腦組織立即凍于-80℃冰箱，分別后續(xù)進行qPCR、Western blotting法檢測幼鼠皮層組織S6蛋白表達變化。
　　結果：1、腦組織大體標本經肉眼觀察及游標卡尺測量結果可見，正常組幼鼠于各個觀察時間點腦組織前后徑以及除P0外其余時間點腦組織上下徑均大于使用X射線照

4、射后所產幼鼠（模型組、溶劑組、雷帕霉素組）徑線，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）;而使用X射線照射后所產幼鼠腦組織各組之間差異無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。但總體來說：模型組腦體積較正常組小，溶劑組與模型組相似，而雷帕霉素組較模型組體積大、趨于正常組。2、光學顯微鏡觀察到正常組幼鼠腦組織皮層及皮層下分層清楚，海馬結構清晰，神經元排列整齊，無異常大小及形狀神經元，胼胝體正常存在;模型組幼鼠腦組織皮層結構紊亂，胼胝體缺失，皮層、海馬區(qū)出

5、現(xiàn)異常神經元結節(jié)，神經元排列不均、極性紊亂等;溶劑組與模型組病理改變無明顯變化;雷帕霉素組仍可見到上述改變，但較模型組及溶劑組病變少，趨向于正常組病理表現(xiàn)。3、qPCR結果提示模型組幼鼠檢測的5個時間點S6mRNA水平均高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）;溶劑組與模型組幼鼠各個時間點S6mRNA水平差異無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05);而雷帕霉素組幼鼠S6mRNA水平均低于模型組，仍稍高于正常組。4、Western blott

6、ing提示模型組幼鼠S6蛋白表達水平自P0開始即顯示出明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）;溶劑組與模型組S6蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）;雷帕霉素組S6蛋白表達量均低于模型組，且高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。
　　結論：在實驗條件下，1、195cGy劑量X射線照射孕17天母鼠后所產子一代可成功建立MCD模型結果，此方法操作簡單，成功率高。2、該動物模型證實了mTOR信號通路與X射