巨噬細(xì)胞IRAK-M分子促進(jìn)結(jié)核分枝桿菌胞內(nèi)存活機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　結(jié)核分枝桿菌是胞內(nèi)寄生菌，入侵宿主時(shí)，特異性感染宿主巨噬細(xì)胞，并在巨噬細(xì)胞中存活。白介素-1受體相關(guān)激酶-M（IRAK-M）屬于IRAK家族成員，是Toll樣受體（TLR）信號(hào)機(jī)制中的負(fù)調(diào)節(jié)分子，特異性表達(dá)于單核/巨噬細(xì)胞。本課題從巨噬細(xì)胞極化的角度，深入探討了巨噬細(xì)胞IRAK-M分子促進(jìn)結(jié)核分枝桿菌胞內(nèi)存活的機(jī)制，以深入了解結(jié)核的發(fā)病機(jī)制以及宿主與結(jié)核分枝桿菌的關(guān)系。
　　方法：
　　免疫熒光染色（Imm

2、unofluorescence，IF）、Western blot和免疫組織化學(xué)技術(shù)（Immunohistochemistry，IHC）用于檢測(cè)M.tb感染U937細(xì)胞和肺結(jié)核組織學(xué)標(biāo)本中IRAK-M的表達(dá)。以經(jīng)PMA誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞的人白血病單核細(xì)胞系U937和人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Jurkat為細(xì)胞模型，分別用慢病毒（lentivirus，LV）為載體構(gòu)建IRAK-M干擾和過(guò)表達(dá)體系，M.tb感染后采用抗酸染色（acid-fast

3、staining，AF）和菌落計(jì)數(shù)（colony forming units，CFU）檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)存活的細(xì)菌數(shù)目。在U937 IRAK-M干擾體系中，M.tb感染后采用Western blot技術(shù)檢測(cè)M1型巨噬細(xì)胞極化標(biāo)記分子pSTAT1、iNOS、NF-κB p65和M2型巨噬細(xì)胞極化標(biāo)記分子pSTAT6、Arg-1、NF-κB p50的表達(dá)；用免疫激活劑CpG7909激活U937巨噬細(xì)胞首先向M1型極化，繼而用M. tb感染細(xì)胞，用免

4、疫熒光和Western blot技術(shù)檢測(cè)IRAK-M在M.tb感染中對(duì)免疫激活劑誘導(dǎo)的M1型巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的影響；用IHC和Western blot技術(shù)檢測(cè)IRAK-M對(duì)與巨噬細(xì)胞殺菌和組織修復(fù)相關(guān)的Hif-1α、pERK1/2的影響。
　　結(jié)果：
　　在結(jié)核感染的巨噬細(xì)胞和肺組織中，IRAK-M的表達(dá)顯著升高（P<0.05）；在Jurkat細(xì)胞中，IRAK-M過(guò)表達(dá)促進(jìn)M. tb細(xì)胞內(nèi)增殖，而在U937細(xì)胞中，干擾IRA

5、K-M后M.tb細(xì)胞內(nèi)增殖受到抑制；在U937細(xì)胞中，結(jié)核感染時(shí)，干擾IRAK-M促進(jìn)巨噬細(xì)胞M1型極化標(biāo)記分子pSTAT1、iNOS、NF-κB p65的表達(dá)，抑制M2型極化的標(biāo)記分子pSTAT6、Arg-1、NF-κB p50的表達(dá)，提示干擾IRAK-M可以促進(jìn)M. tb感染時(shí)巨噬細(xì)胞向M1型極化；2μg/ml免疫激活劑CpG7909可誘導(dǎo)U937細(xì)胞M1型極化，而M. tb感染抑制CpG7909誘導(dǎo)的M1型極化，干擾IRAK-M則