八株土壤放線菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、土壤放線菌是各種活性化合物尤其是抗生素的重要來源。其中，安莎霉素類抗生素具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和生物活性，從土壤放線菌中發(fā)掘具有成藥潛力的新型安莎霉素類化合物是我們的研究目標(biāo)。傳統(tǒng)的天然產(chǎn)物發(fā)掘周期長、效率低，且具有盲目性?；贏HBA合酶是安莎霉素類化合物合成的關(guān)鍵酶，且AHBA合酶基因在不同菌株中具有高度保守性，我們依次通過土壤采集、放線菌分離和逐級(jí)PCR篩選的方法獲得33株AHBA（3-amino-5-hydroxybenzoic aci

2、d）合酶基因陽性菌。本論文通過2次菌株篩選，結(jié)合菌株產(chǎn)量和基因進(jìn)化樹，進(jìn)一步選擇8株潛在安莎霉素產(chǎn)生菌深入研究，并從其次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離得到不同種類的安莎霉素和其他類型化合物，同時(shí)對(duì)發(fā)掘到的新安莎霉素類化合物進(jìn)行活性評(píng)價(jià)。
　　對(duì)菌株Streptomyces sp.S011、S013、S014和S027的固體燕麥培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離和結(jié)構(gòu)鑒定，共得到7個(gè)化合物，包括1個(gè)已知8酮安莎霉素(17-O-demethylgeldanam

3、ycin)，2個(gè)已知9酮安莎霉素（hygrocin C和hygrocin D）和1個(gè)新萘酚類化合物S11B(2)。
　　對(duì)菌株Streptomyces sp.S015、S045和Kitasatospora sp.S023的固體燕麥培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離和結(jié)構(gòu)鑒定，共得到19個(gè)化合物，其中2個(gè)新化合物，即1個(gè)呋喃酮類化合物(S45E)，1個(gè)喹啉類化合物(S45P)，未得到安莎霉素類抗生素，推測(cè)安莎基因簇在這3株菌中低表達(dá)或者不表達(dá)。

4、
　　對(duì)菌株Streptomyces sp.S012的固體燕麥培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離和結(jié)構(gòu)鑒定，共得到22個(gè)化合物，其中12個(gè)新化合物，包括9個(gè)結(jié)構(gòu)類型豐富的新安莎霉素和3個(gè)安莎霉素生物合成中的前體。經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定，此9個(gè)新安莎霉素屬于曲張鏈絲菌素類化合物(streptovaricins)，命名為ansavaricins A-Ⅰ（34-38和42-45），與利福霉素同屬于11酮安莎霉素。從結(jié)構(gòu)上分析，化合物34、35、42-45的脂肪

5、側(cè)鏈（ansa chain）與C-5斷裂，形成新的開環(huán)類曲張鏈絲菌素，目前除本文外僅有1個(gè)此類化合物(streptovaricin U)被報(bào)道。此外，我們對(duì)分離得到的安莎霉素34-45進(jìn)行了生物活性測(cè)試，發(fā)現(xiàn)新化合物ansavaricin E(38)能夠顯著抑制Ⅲ型分泌系統(tǒng)毒性蛋白的分泌，并且不影響鼠傷寒沙門氏菌的生長，從而降低了耐藥性的產(chǎn)生。通過拓?fù)洚悩?gòu)酶體外抑制實(shí)驗(yàn)，證明ansavaricin H(44)具有較強(qiáng)的抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ和