銀杏酚誘導SMMC-7721細胞凋亡及對荷H22小鼠實體瘤生長的抑制作用.pdf

1、銀杏是一種彌足珍貴的具有良好保健功效的藥食兩用植物，銀杏酚酸是銀杏中具有顯著抗腫瘤作用的生物活性成分之一。但目前關(guān)于銀杏酚酸的抗腫瘤活性研究僅局限于對銀杏酸的研究，而對銀杏酚的生物活性研究，尤其是銀杏酚的抗腫瘤作用機理，目前國內(nèi)外尚未見有文獻報道。本文通過銀杏酸脫羧得到銀杏酚，研究銀杏酚體外對SMMC-7721人肝癌細胞生長的抑制作用，并初步探討其抑制機理;通過建立小鼠荷肝癌實體瘤H22模型，研究銀杏酚體內(nèi)用藥對H22實體瘤的抑制作用，

2、研究從三方面進行，主要結(jié)果如下:
　　 1、銀杏酚同系物及銀杏酚C17(:)1單體體外對SMMC-7721細胞生長抑制作用的研究。
　　 采用MTT法，分別從時效和量效兩個方面檢測銀杏酚同系物及銀杏酚C17(:)1單體對SMMC-7721細胞存活率的影響，并分別計算銀杏酚同系物和銀杏酚C17(:)1單體的半數(shù)抑制濃度IC50;然后研究5-FU與銀杏酚同系物聯(lián)合用藥抑制SMMC-7721細胞生長的作用。試驗結(jié)果表明，在0～

3、400μg/mL的劑量范圍內(nèi)，銀杏酚同系物對SMMC-7721細胞呈現(xiàn)一個倒“U”型影響趨勢。當濃度在0-100μg/mL范圍內(nèi)時呈現(xiàn)明顯的量效正相依賴關(guān)系，在100-200μg/mL范圍內(nèi)時銀杏酚對SMMC-7721細胞的抑制作用基本不變，但是當濃度在200μg/mL以上時，銀杏酚對SMMC-7721細胞的抑制率反而下降。在0～30μg/mL的劑量范圍內(nèi)，銀杏酚C17(:)1單體分別作用SMMC-7721細胞24h、48h和72h的I

4、C50分別為(15.33±1.19)μg/mL,(12.20±1.09)μg/mL和(10.88±1.03)μg/mL。當銀杏酚同系物與5-FU按照1∶1和2∶1的比例聯(lián)合作用SMMC-7721細胞時，均表現(xiàn)為拮抗作用，藥物聯(lián)合指數(shù)I分別為1.53和1.12;但是當銀杏酚與5-FU按照4∶1比例聯(lián)合作用于SMMC-7721細胞時，二者表現(xiàn)為協(xié)同抑制SMMC-7721細胞生長作用，藥物聯(lián)合指數(shù)I為0.93。其次，用10μg/mL濃度銀杏酚

5、C17(:)1單體連續(xù)培養(yǎng)SMMC-7721細胞十代，顯微鏡觀察各代細胞形態(tài)變化。結(jié)果表明銀杏酚C17(:)1單體對細胞形態(tài)影響較小。
　　 2、銀杏酚C17(:)1單體體外抑制SMMC-7721細胞生長的機制探究。
　　 采用Ho.33342/PI雙熒光染色法觀察10μg/mL和20μg/mL的銀杏酚C17(:)1單體作用SMMC-7721細胞12h和24h后細胞核的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SMMC-7721細胞出現(xiàn)細胞凋亡特征

6、的細胞核濃縮以及凋亡小體現(xiàn)象。采用Westernblot法檢測5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL濃度的銀杏酚C17:1單體對SMMC-7721細胞凋亡蛋白Bax/Bcl-2表達的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)促凋亡蛋白Bax相對抑凋亡蛋白Bcl-2表達增強。分別用瓊脂糖電泳法和Caspase-3檢測法檢測濃度為10μg/mL和20μg/mL的銀杏酚C17(:)1單體對SMMC-7721細胞DNA和Caspase-3的影響。實驗

7、結(jié)果顯示caspase-3表達增強，但是未見DNALadder出現(xiàn)。
　　 3、銀杏酚同系物體內(nèi)對小鼠肝癌H22實體瘤的影響。
　　 昆明小鼠腹腔傳代建立小鼠肝癌H22實體瘤模型，分別以20、40、80、160mg/Kg劑量的銀杏酚同系物連續(xù)腹腔給藥7d，于末次給藥后24h，眼球取血后脫頸處死小鼠，剝離瘤體，分別摘取脾臟、胸腺，計算抑瘤率、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)，并做血常規(guī)檢測。結(jié)果顯示40、80、160mg/Kg劑量組銀杏酚