腫瘤及凋亡細(xì)胞檢測(cè)的電化學(xué)生物傳感器研究.pdf

1、腫瘤的發(fā)生嚴(yán)重影響著人們的生活質(zhì)量，危及著人們的生命安全，實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞及其生理活動(dòng)的準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)，對(duì)于疾病的確診與治療具有非常重要的意義。目前，有關(guān)檢測(cè)方法已有一些報(bào)道，但普遍操作繁瑣費(fèi)時(shí)、不易定量、儀器昂貴，且要求工作人員有較高的專業(yè)技能。本論文設(shè)計(jì)建立了幾種新型的生物傳感器，實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)物的高靈敏、快速測(cè)定。主要內(nèi)容如下：
　　 (1)利用巰基自組裝技術(shù)制備了壓電核酸適體傳感器，建立了一種新的檢測(cè)人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞的方

2、法，同時(shí)研究了反應(yīng)體系的熱、動(dòng)力學(xué)行為。研究結(jié)果表明：星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞與壓電石英晶體上的核酸適體探針的結(jié)合行為很好地符合Langmuir方程，即它們之間的反應(yīng)是特異性反應(yīng)，反應(yīng)的結(jié)合常數(shù)為6.67×106M-1，25℃時(shí)反應(yīng)速率常數(shù)為1.05×105M-1·s-1。該傳感器響應(yīng)的線性范圍為1.55×103～3.64×104個(gè)/mL，線性回歸方程為△f =-41.6-1.32×10-2c，相關(guān)系數(shù)為0.997，可用于定性、定量檢測(cè)人腦星形膠

3、質(zhì)瘤細(xì)胞，從而為腫瘤的定級(jí)和診斷提供了依據(jù)。
　　 (2)通過巰基在金表面的混合自組裝，將腱肽蛋白c的核酸適體探針固定于金電極表面?；陔祀牡鞍自谀z質(zhì)瘤細(xì)胞表面的高表達(dá)，利用細(xì)胞與電極表面核酸適體探針的特異性生物識(shí)別對(duì)鐵氰化物電化學(xué)阻抗的抑制，建立了膠質(zhì)瘤細(xì)胞檢測(cè)的核酸適體傳感器?？疾炫c優(yōu)化了核酸適體/巰基丙酸混合自組裝比例、反應(yīng)時(shí)間、溫度和離子強(qiáng)度等對(duì)傳感器性能有顯著影響的分析條件，結(jié)果表明該傳感器的阻抗響應(yīng)與膠質(zhì)瘤細(xì)胞濃度呈

4、線性關(guān)系，線性范圍為100-50000個(gè)細(xì)胞/mL，檢測(cè)限可達(dá)50個(gè)細(xì)胞/mL。
　　 (3)基于巰基的自組裝和納米金放大技術(shù)，將磷脂酰絲氨酸(PS)的識(shí)別蛋白Annexin-V固定在金電極表面，構(gòu)建了Annexin-V修飾電極。實(shí)驗(yàn)中將含PS的脂質(zhì)體與腫瘤細(xì)胞進(jìn)行整合，構(gòu)建早期凋亡細(xì)胞模型；利用整合得到的早期凋亡細(xì)胞與電極表面Annexin-V蛋白的特異性生物識(shí)別對(duì)鐵氰化物電化學(xué)阻抗的抑制，構(gòu)建了檢測(cè)早期凋亡細(xì)胞的無標(biāo)記型電化