SIRT1抑制PDGF-BB誘導的血管平滑肌細胞葡萄糖攝取和代謝.pdf

1、目的:血管平滑肌細胞(VSMCs)中葡萄糖攝取和代謝的異常增加能導致動脈粥樣硬化等多種血管疾病，已有研究表明PDGF-BB通過誘導葡萄糖轉運蛋白4(GLUT4)的膜轉位，促進葡萄糖的攝取和代謝。去乙?；窼IRT1能影響胰腺β細胞、脂肪細胞和肝細胞等葡萄糖的攝取和代謝，而在VSMCs中SIRT1與葡萄糖攝取和代謝的關系尚不清楚，本實驗利用SIRT1的激動劑和抑制劑分別處理VSMCs，以探討SIRT1與葡萄糖攝取及代謝的相關性。
　

2、　方法與結果:
　　1、PDGF-BB刺激VSMCs的GLUT4膜轉位
　　PDGF-BB(20 ng/mL)刺激VSMCs0、5、15、30 min后，用Westernblotting及細胞免疫熒光染色檢測GLUT4的亞細胞分布。結果顯示，與對照組相比，在PDGF-BB刺激的VSMCs中，GLUT4膜轉位顯著增強，并在15 min達到高峰。
　　2、SIRT1抑制PDGF-BB誘導的VSMCs的GLUT4膜轉位

3、>　　培養(yǎng)的VSMCs經SIRT1的激動劑白藜蘆醇(50μM)和SIRT1抑制劑EX-527（10μM）預孵育4h后，PDGF-BB(20 ng/mL)刺激15 min。細胞免疫熒光結果顯示，與對照組相比，白藜蘆醇預孵育組GLUT4膜轉位減弱，而EX-527預孵育組GLUT4膜轉位增強。
　　3、PDGF-BB刺激VSMCs葡萄糖攝取
　　PDGF-BB(20 ng/mL)和熒光標記葡萄糖類似物2-N[7-硝基苯-2-乙二酸

4、，34羥氨基]-2-脫氧葡萄糖(2-NBDG,100μM)共同刺激VSMCs0、5、10、20、30、60 min，流式細胞術檢測VSMCs對2-NBDG的攝取。結果顯示，PDGF-BB誘導的VSMCs葡萄糖攝取量呈時間依賴性增強，并在20 min時達到高峰。
　　4、SIRT1抑制PDGF-BB誘導的VSMCs葡萄糖攝取
　　培養(yǎng)的VSMCs經SIRT1的激動劑白藜蘆醇和SIRT1（50μM）抑制劑 EX-527（10μM

5、）預孵育4h后，PDGF-BB(20 ng/mL)刺激20 min，用流式細胞術檢測VSMCs對2-NBDG攝取。結果顯示，與對照組相比，白藜蘆醇預孵育組葡萄糖攝取減弱，而EX-527預孵育組葡萄糖攝取增強。
　　5、PDGF-BB增強VSMCs己糖激酶活性
　　PDGF-BB(20 ng/mL)刺激VSMCs0、5、10、15、30、45、60 min后，檢測VSMCs己糖激酶活性。結果顯示，VSMCs己糖激酶活性與PDG

6、F-BB刺激呈時間依賴性增強，30 min達到高峰。
　　6、SIRT1抑制PDGF-BB誘導的VSMCs己糖激酶活性增強
　　培養(yǎng)的VSMCs經SIRT1的激動劑白藜蘆醇(50μM)和SIRT1抑制劑EX-527(10μM)預孵育4h后，PDGF-BB(20 ng/mL)刺激30 min后檢測VSMCs己糖激酶活性，結果顯示，白藜蘆醇預孵育組己糖激酶活性減弱，而EX-527預孵育組己糖激酶活性增強。
　　結論: