七氟烷后處理對(duì)高糖培養(yǎng)h9c2細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷及細(xì)胞內(nèi)GSK-3β蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 評(píng)估七氟烷后處理對(duì)高糖（33mmol/l葡萄糖）培養(yǎng)和正常糖濃度（5.56mmol/l葡萄糖）培養(yǎng)的h9c2大鼠心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的影響，以及糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)在此過程當(dāng)中所發(fā)揮的作用。
　　 方法：
　　 h9c2大鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分為8組:①正常對(duì)照組(NC);②正常糖濃度缺氧復(fù)氧組(NH/R);③正常糖濃度七氟烷后處理組(N

2、S);④正常糖濃度GSK-3β抑制劑SB216763干預(yù)組(NSB);⑤高糖培養(yǎng)組(HC);⑥高糖缺氧復(fù)氧組(HH/R);⑦高糖七氟烷后處理組(HS);⑧高糖GSK-3β抑制劑SB216763干預(yù)組(HSB)。缺氧復(fù)氧組分別經(jīng)歷3小時(shí)缺氧和3小時(shí)復(fù)氧過程，七氟烷后處理組在復(fù)氧開始的30min進(jìn)行2.4％七氟烷干預(yù)。GSK-3β抑制劑組在復(fù)氧開始前加入GSK-3β抑制劑(SB216763)10umol/l。通過Anexin V/PI雙染法

3、，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。通過免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)GSK-3β蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)及其磷酸化程度。采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定心肌細(xì)胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力，比色法測(cè)定乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)活力和丙二醛(malondialdehydeMDA)含量。
　　 結(jié)果：
　　 在正常糖濃度（5.56mmol/l葡萄糖）培養(yǎng)組，七氟烷后處理使缺氧復(fù)

4、氧損傷導(dǎo)致的h9c2大鼠心肌細(xì)胞凋亡率由20.12±3.48％下降至6.24±1.03％，(P＜0.05)，并且LDH釋放量降低、MDA含量下降、SOD活性增強(qiáng)(P＜0.05);在高糖（33mmol/l葡萄糖）培養(yǎng)組中，七氟烷后處理組(18.92±1.69％)和非七氟烷后處理組(23.32±2.78％)缺氧復(fù)氧損傷導(dǎo)致的h9c2大鼠心肌細(xì)胞凋亡率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。與未加入GSK-3β阻斷劑SB216763的正常糖濃度組(2

5、0.12±3.48％)和高糖組(23.32±2.78％)比較，在復(fù)氧開始前加入GSK-3β阻斷劑SB216763，均使正常糖濃度組(6.42±1.12％)和高糖組(9.78±1.60％)細(xì)胞凋亡減少(P＜0.05)。免疫印跡試驗(yàn)表明，七氟烷后處理能夠增強(qiáng)正常糖濃度組h9c2大鼠心肌細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)GSK-3βSer9的磷酸化表達(dá)，但是在高糖培養(yǎng)組h9c2大鼠心肌細(xì)胞中，這種現(xiàn)象因高糖因素的影響而被取消。
　　 結(jié)論：