沉默PPARγ2對(duì)BMP9介導(dǎo)的C2C12細(xì)胞成骨分化的影響.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　研究沉默PPARγ2在BMP9介導(dǎo)的C2C12細(xì)胞成骨分化的影響及可能機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　采用化學(xué)發(fā)光測(cè)定法、組織化學(xué)染色、PCR、Western blotting、螢光素酶報(bào)告質(zhì)粒等技術(shù)，研究沉默PPARγ2在BMP9誘導(dǎo)的小鼠C2C12細(xì)胞成骨分化的影響。具體方法如下:
　　1.檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合使用AdSimPPARγ2、AdBMP9后，C2C12細(xì)胞早期成骨指標(biāo)堿性磷酸酶(alkali

2、ne phosphatase，ALP)的活性變化。
　　2.從基因表達(dá)水平和蛋白質(zhì)表達(dá)水平檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后，C2C12細(xì)胞早期成骨指標(biāo)的表達(dá)情況
　　3.檢測(cè)AdSimPPARγ2和/或AdBMP9對(duì)C2C12細(xì)胞成脂分化轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα的影響。
　　4.檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后，晚期骨鈣蛋白(OCN)的表達(dá)及礦化基質(zhì)沉積的變化。
　　5

3、.利用報(bào)告質(zhì)粒及Western blotting，檢測(cè)使用AdSimPPARγ2和/或BMP9對(duì)BMPR-Smad信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　6.利用Western blot，檢測(cè)使用AdSimPPARγ2和/或BMP9對(duì)PTEN信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　7.利用RT-PCR，檢測(cè)使用AdSimPPARγ2和/或BMP9對(duì)IGF1細(xì)胞因子的影響，利用條件培養(yǎng)基，過(guò)表達(dá)IGF1，比較IGF1與AdSimPPARγ2對(duì)細(xì)胞

4、堿性磷酸酶活性的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應(yīng)用增強(qiáng)早期C2C12細(xì)胞ALP活性。
　　2.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應(yīng)用增加AdBMP9誘導(dǎo)的C2C12細(xì)胞早期成骨轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。
　　3.AdSimPPARγ2和BMP9聯(lián)合應(yīng)用能抑制AdBMP9誘導(dǎo)的C2C12細(xì)胞成脂分化因子C/EBPα的表達(dá)。
　　4.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合

5、應(yīng)用抑制AdBMP9誘導(dǎo)的晚期骨鈣素的表達(dá)并減弱C2C12細(xì)胞礦化基質(zhì)沉積。
　　5.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應(yīng)用僅能在早期激活BMPR-Smad信號(hào)通路。
　　6.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應(yīng)用能抑制AdBMP9誘導(dǎo)的PTEN信號(hào)通路。
　　7.AdSimPPARγ2促進(jìn)AdBMP9誘導(dǎo)的C2C12細(xì)胞早期成骨中IGF1基因表達(dá)，從而增強(qiáng)早期成骨分化。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　沉