一型糖尿病血清miRNAs的生物標記物研究.pdf

1、第一部分：血清miRNAs在胰島自身抗體陽性人群中的表達及臨床意義的研究
　　目的：本實驗旨在一型糖尿病自身抗體陽性家屬中探索一型糖尿病的早期血清miRNAs生物標記物。
　　實驗方法：我們用85個胰島自身抗體陽性的一型糖尿病家屬和79個胰島自身抗體陰性的一型糖尿病家屬作為研究對象。研究對象的血清標本來自美國一型糖尿病預防隊列研究（Diabetes Prevention Trial, Type1 diabetes, DPT-

2、1）。通過Taqman microarray初步檢測754個MiRNAs的表達量，篩選出候選miRNA。差異表達的候選MiRNAs進一步采用實時定量聚合酶鏈反應(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測并驗證其表達量。
　　實驗結果：qRT-PCR檢測結果顯示，胰島自身抗體陽性和陰性的群體相比，miR-548a-3p, miR-184, miR-200a

3、, miR-374b, miR-518f, miR-561, miR-574-3p, miR-197和 miR-146a在胰島自身抗體陽性的群體的血清中表達明顯下調(diào)。然而miR-30c表達明顯上調(diào)(p值＜0.05). MiRNAs組合(miR-146a, miR-197, miR-193b, miR-574-3p, and miR-561)可以更好地（高特異性和高敏感型）區(qū)分胰島自身抗體陽性和陰性群體。
　　結論：我們發(fā)現(xiàn)單個mi

4、RNA或五個miRNAs組合與胰島素自身抗體的密切相關性，能夠作為生物標記物對一型糖尿病家屬的胰島自身抗體進行篩查和診斷，為臨床一型糖尿病的早期預測提供有效依據(jù)。
　　第二部分：血清miRNAs在一型糖尿病人群中的表達及臨床意義的研究
　　背景：一型糖尿病（T1D）是T細胞介導的β細胞受損的自身免疫性疾病，其發(fā)病率每年以3-4%的速率增加。T1D診斷時90%的β細胞已經(jīng)喪失功能，此時 T1D的高危人群失去了早期預防的機會。因

5、此急需一種新的生物標記物有助于早期診斷T1D并用于監(jiān)測T1D的自身免疫進展。miRNAs是很多生理病理過程的重要調(diào)節(jié)者，并且作為很多疾病的標記物。我們前期研究發(fā)現(xiàn)T1D的小鼠血清的miRNAs可以作為T1D疾病進展的重要標記物。我們進一步在胰島自身抗體陽性的人群中驗證，發(fā)現(xiàn)血清miRNAs可以預測胰島自身抗體。本實驗在前期研究基礎上，進一步在T1D人群中研究血清miRNAs,旨在探索一型糖尿病的早期血清miRNAs生物標記物。
　

6、　實驗方法：我們用107個新發(fā)T1D病人和106個胰島自身抗體陽性的一型糖尿病親屬作為研究對象。研究對象的血清標本來自美國一型糖尿病預防隊列研究（Diabetes Prevention Trial, Type1 diabetes, DPT-1）。通過Taqman microarray初步檢測754個MiRNAs的表達量，篩選出候選miRNA。差異表達的候選MiRNAs進一步采用實時定量聚合酶鏈反應(quantitative real-t

7、ime polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測并驗證其表達量。采用TargetScan, miRBase，polymiRTS和T1dbase分析預測miRNAs的靶基因及生物信息功能
　　實驗結果：qRT-PCR檢測結果顯示，T1D病人與胰島自身抗體陽性非糖尿病人群相比，三個血清miRNAs(hsa-miR-218, hsa-miR-381和 hsa-miR-618表達明顯上調(diào)(兩獨立樣本t檢驗，

8、p值＜0.05)。這些miRNAs與胰島β細胞的凋亡及一型糖尿病發(fā)病機制的相關通路有關。線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，miR-218表達水平與T1D病人的空腹C-肽水平負相關。進一步在新診斷T1D人群中分析miRNAs與C肽水平的關系，發(fā)現(xiàn)26個miRNAs水平與C肽濃度相關，可能參與了β細胞功能的調(diào)節(jié)。
　　結論：我們發(fā)現(xiàn)miR-218在新發(fā)T1D病人的血清中表達水平升高，而且血清miR-218表達水平與與胰島β細胞的受損過程相關。miR-