NGR修飾的多西他賽pH敏感長循環(huán)脂質體的研究.pdf

1、多西他賽自臨床應用以來，治療腫瘤的效果顯著，上市制劑的臨床應用越來越廣泛，但其胃腸道和血液系統(tǒng)毒性、過敏反應等毒副作用，影響臨床治療，給患者帶來痛苦。因此通過新型的藥物遞送系統(tǒng)的研究，進一步提高藥物的治療指數，降低毒副作用，是目前相關研究的熱點之一。在藥物遞送系統(tǒng)的研究中，通過納米材料、生物技術和物理化學等理論設計腫瘤靶向脂質體，從而進一步提高藥物療效，降低毒副作用，是研究的重要方向。普通脂質體由于易被網狀內皮細胞吞噬并清除而難以進入腫

2、瘤組織，聚乙二醇修飾的脂質體延長其在血液中的滯留時間，容易透過腫瘤組織的毛細血管，更有效地在腫瘤部位滲漏和聚集。利用靶向腫瘤本身及腫瘤新生血管內皮細胞上的某些受體的多肽對脂質體表面進行修飾，能夠進一步增強制劑的靶向性，降低毒副作用。
　　本課題在普通pH敏感脂質體的基礎上，制備被動和主動腫瘤靶向相結合的NGR修飾的多西他賽pH敏感長循環(huán)脂質體:通過聚乙二醇(PEG)修飾達到長循環(huán)功能，減少網狀內皮系統(tǒng)的吞噬和清除，提高制劑體內穩(wěn)定

3、性;采用腫瘤靶向多肽NGR進行修飾，使脂質體能夠主動靶向至腫瘤部位，提高藥物在腫瘤組織的聚集量;利用琥珀酸膽固醇單酯（CHEMS）的pH敏感機制靶向釋放藥物，共同實現(xiàn)靶向遞送和控制釋放的功能。本文通過處方篩選制備了多西他賽pH敏感長循環(huán)脂質體(DTX/PLL)和NGR修飾的多西他賽pH敏感長循環(huán)脂質體(DTX/NGR-PLL)，研究脂質體的理化性質和體外釋放特性，并考察了脂質體的藥物動力學性質和體內外腫瘤靶向性。主要研究方法與結果如下:

4、
　　1.DTX/PLL的制備與評價
　　采用HPLC測定多西他賽的含量，建立測定脂質體包封率的方法。在多西他賽pH敏感脂質體處方研究的基礎上，以脂質體包封率為指標，通過單因素篩選確定脂質體中長循環(huán)材料CHEMS-PEG2000的用量。結果表明長循環(huán)材料的用量為磷脂酰乙醇胺(PE)的5％時包封率最高，包封率為71.88±0.99％，為最優(yōu)處方。按照最優(yōu)處方制備脂質體，并對其進行考察，結果表明所制脂質體外觀形態(tài)良好，粒徑為19

5、2.54±7.73nm，Zeta電勢為-27.9±0.9mV。為研究脂質體釋放的pH敏感特性，在不同pH釋放介質中進行體外釋放實驗，測定不同制劑的體外釋藥特征。結果表明與多帕菲(@)相比DTX/PLL在pH7.4介質中較穩(wěn)定，72h時累計釋放率達到81.88％，證明其具有緩釋功能;而在pH5.0介質中DTX/PLL釋放加快，48h時累計釋放率為85.50％，證明了其pH敏感的體外釋放特性。
　　2.DTX/NGR-PLL的制備與評

6、價
　　為進一步提高脂質體的腫瘤靶向性，通過在脂質體表面飾靶向多肽實現(xiàn)腫瘤的主動靶向。設計合成具有氨肽酶(CD13)受體靶向的多肽NGR的CHEMS-PEG2000-GNGRG聚合物，以脂質體包封率、細胞熒光攝取強度為指標，在DTX/PLL的基礎上進行處方篩選，確定DTX/NGR-PLL的最優(yōu)處方中靶向材料用量為PE的0.8％;最優(yōu)處方所制脂質體脂質體外觀形態(tài)良好，粒徑為202.34±7.40nm，Zeta電勢為-25.7±2.9

7、mV;體外釋放實驗表明，NGR修飾后的脂質體DTX/NGR-PLL中藥物釋放行為與未修飾的脂質體DTX/PLL相似，DTX/NGR-PLL在pH7.4介質中72h時累計釋放率為81.58％，而在pH5.0介質中脂質體48h時累計釋放率為89.39％，證明其緩釋及pH敏感特性;初步穩(wěn)定性評價實驗中，室溫(25℃)條件下保存3周、低溫4℃冰箱中6周，脂質體溶液的外觀性狀、粒徑和EE的變化不大，穩(wěn)定性較好。
　　3.藥物動力學研究

8、>　　為評價脂質體的體內長循環(huán)功能，本部分以多帕菲(@)和普通pH敏感脂質體(DTX/PSL)作為對照制劑，考察DTX/PLL和DTX/NGR-PLL在大鼠體內的藥代動力學特性。DTX/PLL和DTX/NGR-PLL在各個時間點的血藥濃度較多帕菲(@)和DTX/PSL溶液組明顯提高，AUC0-∞值都顯著增大，DTX/PLL和DTX/NGR-PLL(AUC0-∞=41.521和AUC0-∞=46.430)，較Duopafei(@)（AUC

9、0-∞=12.290）和DTX-PSL(AUC0-∞=28.749)組明顯提高，與普通脂質體(DTX/PSL)相比，PEG修飾的兩種長循環(huán)脂質體(DTX/NGR-PLL＞DTX/PLL)在大鼠體內的滯留時間(MRT)更加延長，MRT0-∞:DTX/NGR-PLL＞DTX/PLL＞DTX/PSL，實驗結果表明DTX/PLL和DTX/NGR-PLL均可明顯延長藥物的MRT，具有顯著的體內長循環(huán)的作用。
　　4.體內、外的靶向性研究

10、r>　　通過MCF-7[CD13(-)]和HT-1080細胞[CD13(+)]考察脂質體的體外腫瘤靶向性。MTT法測定的細胞毒性結果表明DTX/PLL和DTX/NGR-PLL的抗腫瘤活性較游離藥物明顯增強，IC50值均降低，且DTX/NGR-PLL對HT-1080的細胞毒性較DTX/PLL明顯增強;細胞攝取實驗中兩種細胞對脂質體的攝取較游離溶液明顯增強，兩種細胞對兩種制劑攝取的不同，驗證了脂質體中NGR多肽的靶向作用。熒光探針標記的脂質

11、體在荷瘤裸鼠腫瘤組織的熒光切片實驗表明，兩種脂質體均能成功靶向至腫瘤組織，靶向肽修飾后的靶向效果更明顯，證明DTX/NGR-PLL在體內具有較強的腫瘤靶向能力。給藥組小鼠組織、切片表明，DTX/NGR-PLL脂質體具有良好的安全性，對主要器官無明顯毒性。
　　本文合成了NGR修飾的靶向材料，通過篩選制備了DTX/PLL和DTX/NGR-PLL，所制脂質體外觀良好，粒徑均勻，體外釋放實驗證明了脂質體的pH敏感特性，大鼠體內藥物動力學