綿羊轉(zhuǎn)FST基因骨骼肌細(xì)胞系的建立及其對(duì)發(fā)育相關(guān)基因的影響.pdf

1、分類號(hào)UDC學(xué)校代碼!Q12魚(yú)密級(jí)編號(hào)學(xué)號(hào)3Q窆Q8Q量量論文題目研究生：量整堡指導(dǎo)教師：僉明副班窒員專業(yè)：動(dòng)物堂研究方向：生殖生物堂壁生物撞苤學(xué)院：生金科堂堂隨二。一二年五月內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文綿羊轉(zhuǎn)FST基因骨骼肌細(xì)胞系的建立及其對(duì)發(fā)育相關(guān)基因的影響摘要卵泡抑制素(follistatin，F(xiàn)ST)是一種單鏈糖蛋白，是從卵泡液中分離獲得的，也稱為性激素抑制蛋白。FST具有多種生物學(xué)功能，其中FST能與肌肉抑制素(MSTN)結(jié)合形成二

2、聚體，抑制MSTN與受體結(jié)合，從而調(diào)節(jié)肌肉的生長(zhǎng)發(fā)育。為了研究FST基因?qū)倚蠊趋兰〖?xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育的作用機(jī)制，本研究在骨骼肌細(xì)胞中特異性高表達(dá)FST基因，探討FST過(guò)表達(dá)對(duì)綿羊肌源性細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和相關(guān)基因表達(dá)的影響。我們首先利用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法分別將骨骼肌特異表達(dá)FST的真核表達(dá)載體PCFCDs—red和PSPFCDs—red轉(zhuǎn)染到骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞和肌管細(xì)胞中，獲得特異表達(dá)目的基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系，然后分析轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，并通過(guò)流式細(xì)胞

3、檢測(cè)、實(shí)時(shí)定量PCR及蛋白免疫印記等方法研究目的基因及其相關(guān)基因的表達(dá)水平，從而獲得高效穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系，為制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物提供細(xì)胞模型。1骨骼肌特異表達(dá)載體轉(zhuǎn)染綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞并誘導(dǎo)為成肌細(xì)胞利用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將骨骼肌特異性載體轉(zhuǎn)染到綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，通過(guò)G418和紅色熒光蛋白雙篩選獲得轉(zhuǎn)基因細(xì)胞陽(yáng)性克隆。擴(kuò)大培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，通過(guò)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因肌管細(xì)胞。選取陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因肌衛(wèi)星細(xì)胞和肌管細(xì)胞繪制生長(zhǎng)曲線并對(duì)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性細(xì)胞的細(xì)