酶解魷魚內臟制備功能性短肽的研究.pdf

1、本文以水解度、氮收率為指標，研究酶解魷魚內臟制備短肽的最佳反應條件，并對酶解產(chǎn)物進行分析研究，研究酶解后產(chǎn)物的抗氧化活性、短肽的鏈長，以及短肽分子量的大?。辉趩我蛩卦囼灥幕A上，Box-Behnken中心組合設計原理，以及響應面分析方法，模擬得到二次多項式回歸方程的預測模型。最終得出溫度、PH、加酶量、反應時間4種反應條件對酶解程度的影響；具體試驗情況如下：
　　1.試驗選取堿性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、動物蛋白酶、中性蛋白酶

2、、風味蛋白酶對魷魚內臟進行水解，通過測定水解液的總氮含量、氨基態(tài)氮含量，比較各水解液的水解度及水解得率，選取較優(yōu)的蛋白酶-胰蛋白酶。經(jīng)大孔樹脂對胰蛋白酶水解液進行水、20％、60%、80%甲醇-水梯度洗脫，經(jīng)液相質譜(LC-MS)進行分析，可以得知水解液短肽分子量范圍在200～2400，其中以60%梯度洗脫的水解分子量分布范圍較為集中，且以分子量在200左右的化合物為主，對各洗脫梯度水解液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由

3、基清除能力分析可知60%梯度洗脫水解液DPPH清除能力為40.21%。結論：胰蛋白酶為水解魷魚內臟較優(yōu)的蛋白酶，且60%甲醇-水為最優(yōu)洗脫濃度。
　　2.以魷魚內臟為研究對象，選用水解度和氮收率作為衡量魷魚內臟酶解工藝的指標，在單因素基礎上，選用pH、酶解溫度、酶解時間、酶添加量等作為自變量，在pH為8.0時，水解效果最佳，溫度達到45℃時，水解度和氮收率均達到最大值，酶解時間為4h時，魷魚內臟的酶解效果最佳，當酶添加量為0.3%

4、時，魷魚內臟蛋白酶解較為充分為節(jié)約生產(chǎn)成本，并結合兩評價指標該加酶量最佳酶添加量，水解后的肽鏈長度與水解度有密切的的關系，氮收率決定了水解程度，兩個指標相結合，在達到兩個指標都最優(yōu)的時候，既保證短肽的長度，又保證了水解得率，單因素水平上pH、酶解溫度、酶解時間、酶添加量的較優(yōu)添加量的確定為響應面分析方法奠定了基礎，更好的確定了研究水平。
　　3.以魷魚內臟為研究對象，選用水解度和氮收率作為衡量魷魚內臟酶解工藝的指標，首先篩選出胰蛋

5、白酶最有利于魷魚內臟的酶解。在單因素基礎上，選用pH、酶解溫度、酶解時間、酶添加量等作為自變量，以水解度作為響應值，利用Box-Behnken中心組合設計原理，以及響應面分析方法，模擬得到二次多項式回歸方程的預測模型。根據(jù)該模型并結合實際，確定魷魚內臟酶解的最佳工藝條件為pH8.0，酶解溫度43℃，酶解時間4.0h，酶添加量0.27%，預測響應值為72.62%。在此條件下，魷魚內臟酶解后的水解度平均值為73.58%，與預測值的相對偏差為