米曲霉產中性蛋白酶高產菌株的選育及其發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、中性蛋白酶是一類最適作用pH為6.5~7.5的蛋白酶,它能將大分子蛋白質水解為肽類和游離氨基酸,被廣泛應用于醫(yī)藥、食品和皮革等行業(yè)。
　　本論文以米曲霉H0作為出發(fā)菌株,經紫外線、DES復合誘變,通過干酪素培養(yǎng)基篩選,得到一株中性蛋白酶高產菌株H2-5,其酶活力達到2158 U/g,傳代培養(yǎng)10代,菌株遺產穩(wěn)定性能良好。
　　確定了該菌株復合誘變的條件為:15 W紫外燈照射,距離為25 cm,照射時間為120 s;DES誘變

2、濃度為2％,誘變時間15 min。通過復合誘變,篩選出一株產中性蛋白酶酶活力較高的菌株H2-5,其酶活較出發(fā)菌株提高了108.5%。
　　研究了發(fā)酵培養(yǎng)條件對菌株的產酶影響:其中碳氮源、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度、料水比及培養(yǎng)基初始pH值等對酶活影響較大;活性劑、無機鹽對酶活也有影響。通過單因素實驗確定了培養(yǎng)基組成為:碳源為麥麩、氮源為豆粕、碳氮比為4:1、料水比為5:4,確定了培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)時間為84 h、初始培養(yǎng)基pH值為7.5、活

3、性劑為吐溫-80、無機鹽為KH2PO4和Na2HPO4、培養(yǎng)溫度為30~32℃(前36 h為32℃,后期溫度為30℃),還確定了Ca2+對酶活的抑制作用。
　　研究了以單因素實驗結果為參照,利用響應面實驗來確定多因素對米曲霉產中性蛋白酶的影響。通過響應面實驗結果可知,發(fā)酵培養(yǎng)基的最適配方為:麥麩13.42 g,豆粕3.45 g,料水比1.29,中性蛋白酶產量為5561.76 U/g,經過驗證實驗檢測酶活力為5604 U/g,發(fā)現(xiàn)模