膠原微纖維體外礦化的研究.pdf

1、自然界生物礦物以其高度精細化、微型化、分等級組織、有機無機雜化以及優(yōu)異的機械性能吸引著科學家，他們致力于弄清其基本構造單元以及合成原理，用于啟發(fā)和指導材料的仿生合成，使人工材料具有優(yōu)異的結構或功能。在骨骼體系中，非膠原蛋白起著非常重要的作用，主要是捕獲礦物離子形成不定形前驅體，進而誘導其在膠原中的生長，形成高度有序分等級的結構，使骨骼具有優(yōu)異的機械性能。理解膠原微纖維礦化的機制，并用該機制來指導合成新穎的高性能仿生材料具有重要意義。

2、r>　　 本文采用PCR技術擴增目的基因片段，再通過酶切、連接反應將目的基因構建在pET-28a(+)、pMAL-p4x、pTWIN1載體質粒上，測序結果表明三種載體均構建正確。然后通過反向PCR在構建好的載體質粒上分別刪除不同序列來獲得含不同片段的目的基因，測序結果表明這些載體序列均正確。
　　 將構建成功的質粒轉入到表達型宿主細胞中，37℃搖床培養(yǎng)，當細菌培養(yǎng)至OD6000.6～0.8時，加入IPTG(終濃度1mM)誘導目

3、的蛋白表達。全蛋白和純化后SDS-PAGE電泳結果表明，構建在pET-28a(+)和pTWIN1載體上目的蛋白均沒有明顯表達跡象，構建在pMAL-p4x載體上的pMAL-p4x-PH1也沒有明顯表達跡象，但是其余三組pMAL-p4x-HA1、pMAL-p4x-HA2和pMAL-p4x-rBSP均表達，同時重組蛋白有降解現(xiàn)象。在pMAL-p4x載體上去除信號肽后表達結果類似，仍存在降解現(xiàn)象，但是表達量增加。
　　 將涂敷重構膠原的