凝膠上水楊醛吖嗪蛋白質(zhì)熒光染色技術(shù)研究.pdf

1、目的:
　　1.研究開(kāi)發(fā)快速、靈敏、選擇性強(qiáng)的蛋白質(zhì)熒光檢測(cè)方法，為聚丙烯酰胺凝膠上蛋白質(zhì)的檢測(cè)提供合適的方法;
　　2.探究凝膠上蛋白質(zhì)的檢測(cè)機(jī)理，闡明熒光染料與蛋白質(zhì)的相互作用，探討其作用方式和作用機(jī)理，將有助于人們從分子水平上了解檢測(cè)機(jī)制。
　　方法:
　　1.蛋白質(zhì)熒光檢測(cè)方法:通過(guò)對(duì)現(xiàn)有的一維和二維凝膠進(jìn)行不同染色方法進(jìn)行比較，如水楊醛吖嗪(SA)染色、曙紅負(fù)染法、SYPRO Ruby染色法、GA-銀染

2、法，建立最快速、靈敏、選擇性強(qiáng)的熒光染色方法;2.為了能更深入的研究熒光檢測(cè)的機(jī)理，通過(guò)分子模型研究、LC-MS/MS等多種研究手段來(lái)共同探究熒光染料與蛋白質(zhì)的相互作用，比較不同染色方法的優(yōu)缺點(diǎn)。
　　結(jié)果:
　　1.水楊醛吖嗪(SA)染色蛋白質(zhì)檢測(cè)方法的特性及優(yōu)化
　　(1)固定:凝膠放入固定液中固定20分鐘，固定液由40％乙醇與20％乙酸組成;
　　(2)水洗:凝膠用去離子水洗兩次，每次洗5分鐘;
　　

3、(3)染色:凝膠在50ml染色液中染色5分鐘，染色液組成為25μ M SA，10mMNaOH溶液;
　　(4)脫色:凝膠放入1％乙酸溶液中脫色5分鐘;再將凝劑放入0.2％硼酸鈉、0.5％碳酸鈉溶液中脫色20分鐘。
　　2.通過(guò)與3種方法（曙紅負(fù)染法、SYPRO Ruby染色法、GA-銀染法）的比較，顯示SA法的靈敏度達(dá)0.2-0.4ng，是SYPRO Ruby染色法的四倍，與GA-銀染法一致。
　　3.通過(guò)分子模型研究