動物源性食品重要致病菌的調(diào)查及多重PCR檢測方法的建立.pdf

1、沙門氏菌（Salmonella spp）、單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytohenes）、大腸桿菌O157：H7(Escherichia coli O157：H7)和空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni)，是引起人動物源性食物中毒最常見病原菌。此四種病原菌在自然界中廣泛存在，同時也是畜禽體內(nèi)的共生菌。本課題研究目的：1、建立能夠快速檢測動物源性食品中這四種病原菌的多重PCR方法；2、參照國標(biāo)法，結(jié)

2、合建立的多重PCR檢測方法對廣西南寧市售新鮮動物源性食品中四種病原菌的污染情況調(diào)查；3、對2009-2010年送檢的病禽及市售新鮮動物源性食品中檢出的沙門氏菌進(jìn)行血清型鑒定，分析動物源性食品檢出的沙門氏菌的可能污染來源。
　　 參考空腸彎曲桿菌、大腸桿菌O157：H7、沙門氏菌和單核細(xì)胞增生李斯特菌的保守序列，設(shè)計相應(yīng)的引物，優(yōu)化反應(yīng)條件，建立了檢測此四種病原菌的多重PCR方法。該方法的特異性試驗表明，四對引物只能擴增各自對應(yīng)的

3、病原菌DNA片段，而對其它非目標(biāo)病原菌則無擴增。
　　 2009年至2010年間采集廣西南寧市6個農(nóng)貿(mào)市場及3個超市零售的新鮮動物源性食品（包括牛肉、豬肉、雞肉、鴨肉、雞蛋）進(jìn)行四種病原菌的檢測。結(jié)果顯示，在總共315份檢測樣品中，沙門氏菌檢出率為20.9％(66/315)、空腸彎曲桿菌檢出率為7％(13/185)、單核細(xì)胞增生李斯特菌檢出率為3％(7/185)，未檢出O157：H7(0/185)。
　　 對檢出沙門氏菌

4、菌株進(jìn)行的血清型鑒定發(fā)現(xiàn)，動物源性食品最常見的血清型依次為豬霍亂沙門氏菌、德比沙門氏菌、雞沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、傷寒沙門氏菌、鴨沙門氏菌等，而從臨床病禽中檢出的最常見血清型依次為雞沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、爪哇那沙門氏菌和紐波特沙門氏菌。
　　 本課題研究結(jié)果證明，建立的四重PCR檢測方法能快速、高效地檢測食源性致病菌，可作為現(xiàn)用國標(biāo)法的補充。廣西南寧市售動物源性食品致病菌以沙門氏菌污染為主，除動物自身患病為主要的污染來源之