食品中呋喃它酮代謝物酶免疫分析方法的研究.pdf

1、目前，世界很多國家與地區(qū)通常都采用LC-MS、LC-MS/MS方法來檢測(cè)動(dòng)物性食品中硝基呋喃類藥物及其代謝物的殘留情況，這種方法存在需要利用專業(yè)人員進(jìn)行操作、昂貴的設(shè)備以及樣品復(fù)雜的前處理的缺點(diǎn)，所以我們需要建立快速準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，便于執(zhí)法人員的監(jiān)督與檢測(cè)，有利于市場(chǎng)的安全。本文建立了動(dòng)物性食品中呋喃它酮代謝物 AMOZ殘留的酶免疫檢測(cè)方法。本研究從呋喃它酮代謝物AMOZ開始，將 AMOZ與4-CBA偶聯(lián)得到其衍生物 CPAMOZ，采用

2、活化酯法將CPAMOZ與 OVA偶聯(lián)合成包被原 CPAMOZ-OVA，利用活化酯法與混合酸酐法將CPAMOZ與HRP偶聯(lián)制備出酶標(biāo)抗原CPAMOZ-HRP。分別建立了化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附法，對(duì)反應(yīng)中的條件如包被抗體量、酶標(biāo)抗原稀釋倍數(shù)、包被條件、封閉液、化學(xué)發(fā)光時(shí)間與顯色時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化，建立了化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附法的直接競(jìng)爭(zhēng)法，對(duì)反應(yīng)中的條件包被抗原量、抗體稀釋倍數(shù)優(yōu)化，其他優(yōu)化條件與直接競(jìng)爭(zhēng)法相同，建立了化

3、學(xué)發(fā)光酶免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附法的間接競(jìng)爭(zhēng)法。每種分析法都做了與其他結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)，檢驗(yàn)方法的特異性。以雞肉、魚肉、豬肉三種樣品進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，AMOZ的添加量分別為0ng/g、1 ng/g、5 ng/g、15 ng/g，經(jīng)過衍生化的前處理，計(jì)算回收率與變異系數(shù)，驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性。
　　通過核磁氫譜驗(yàn)證成功合成了AMOZ的衍生物CPAMOZ，通過紫外分光光度法以及后面的試驗(yàn)驗(yàn)證成功合成了完全抗原 CPAMOZ-OVA與酶

4、標(biāo)抗原CPAMOZ-HRP。建立了檢測(cè)動(dòng)物性食品中AMOZ的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附法，化學(xué)發(fā)光酶免疫直接競(jìng)爭(zhēng)法 IC50為0.5ng/mL,最低檢測(cè)限(LOD)為0.07ng/mL；間接競(jìng)爭(zhēng)法IC50為0.079ng/mL，LOD為2.44pg/mL。ELISA法直接競(jìng)爭(zhēng)法的IC50為1.1ng/mL，LOD為0.1ng/mL；間接競(jìng)爭(zhēng)法的IC50為0.3ng/mL，LOD為0.045ng/mL。該方法都對(duì)呋喃它酮原藥有一定