過(guò)渡金屬取代的多酸鹽對(duì)酪氨酸酶的抑制機(jī)理研究.pdf

1、酶促反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致果蔬顏色變化，這不但降低了消費(fèi)者對(duì)果蔬的視覺(jué)效應(yīng)，同時(shí)也減少了果蔬中維生素、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量。De Castro研究報(bào)道，果實(shí)褐變與多酚氧化酶活性有密切關(guān)聯(lián)。酪氨酸酶（英文全稱：Polyphenol oxidase，縮寫(xiě)為PPO，EC1.14.18.1），是一種多功能的含銅酶。酪氨酸酶可以氧化酚類化合物生成醌，醌是一種高度反應(yīng)性化合物，可以自發(fā)地聚合而形成大分子黑色素，導(dǎo)致果實(shí)褐變，同時(shí)，它也可以結(jié)合其他化合物，如胺

2、、氨基酸、肽和蛋白質(zhì)，導(dǎo)致果蔬營(yíng)養(yǎng)損失。此外，酪氨酸酶還與黑素瘤和帕金森氏病有關(guān)。因此，不論在食品保鮮還是臨床醫(yī)學(xué)上，酪氨酸酶抑制劑研發(fā)均受到科研工作者的廣泛關(guān)注。多金屬氧酸鹽（Polyoxomatalates, POMs）具有結(jié)構(gòu)多樣性和新奇的功能特性，在許多領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，研究證實(shí)，POMs對(duì)酪氨酸磷酸酶、蛋白激酶、ATP酶等有強(qiáng)烈的抑制能力，是一種潛在有效的酶抑制劑。因此，本文通過(guò)研究過(guò)渡金屬取代的POMs對(duì)酪氨酸酶的抑制機(jī)理，

3、旨在擴(kuò)展POMs的應(yīng)用和研制一類安全有效的新型酪氨酸酶抑制劑和果蔬保鮮劑。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴合成三種釩取代型多金屬氧酸鹽（α-SiW9V3，α-SiW10V2，α-SiW11V），并采用酶動(dòng)力學(xué)方法研究其對(duì)蘑菇酪氨酸酶活性的抑制影響。結(jié)果表明，α-SiW9V3對(duì)酪氨酸酶有較強(qiáng)的抑制作用，IC50為0.68 mmol·L-1，0.70 mmol·L-1α-SiW9V3使得單酚酶的遲滯時(shí)間增長(zhǎng)了2.77倍。α-SiW9V3對(duì)

4、酪氨酸酶單酚酶的抑制機(jī)理表現(xiàn)為可逆過(guò)程，抑制類型研究表明為混合型，其抑制常數(shù)K I、K IS分別為4.22 mmol·L-1和2.39 mmol·L-1。⑵合成了2種過(guò)渡金屬（Co、Ni）取代磷鉬酸鹽，并結(jié)合Native-PAGE電泳和分光光度法研究和比較磷鉬酸及其二種過(guò)渡金屬（Co、Ni）取代磷鉬酸鹽對(duì)蘑菇酪氨酸酶的抑制作用。研究結(jié)果證實(shí)酪氨酸酶是多家族基因編碼的，且均具有活性，磷鉬酸及其過(guò)渡金屬取代磷鉬酸鹽對(duì)其二酚酶均具有明顯的抑制

5、作用，且為酪氨酸酶可逆性抑制劑，其中PMo12和 PMo11Co的抑制類型為競(jìng)爭(zhēng)型，其抑制常數(shù) KI分別為9.03和1.71 mmol·L-1， PMo11Ni為混合型抑制劑，其抑制常數(shù)分別為KI=0.83 mmol·L-1和KIS=1.03 mmol·L-1。綜合考慮IC50值和抑制常數(shù)等參數(shù)，比較這三種化合物對(duì)酪氨酸酶抑制作用的強(qiáng)弱。⑶合成并表征了 SiW11 Co，并以其為效應(yīng)物，利用 Native-PAGE電泳法和分光光度法研究