龍眼多糖的流變性、結構鑒定及其清除自由基活性研究.pdf

1、龍眼（Dimocarpus longan lour.）屬于無患子科（Sapindaceae）龍眼屬(DinocarpusLour.)植物，原產于中國，同荔枝、香蕉、菠蘿同為華南四大珍果。古書中曾記載益智寧心，養(yǎng)血安神，長智斂汗，開胃益脾，潤肺止咳等，還能治產后浮腫，氣虛水腫，脾虛泄瀉，被視為藥食兩用的珍寶。但是龍眼不耐貯存，易變干、褐變或因滋生微生物而導致果實腐爛，導致貨架期變短。且龍眼以鮮食為主，用于加工制成產品的龍眼占總量比例不到3

2、0％。加之產量的大幅增加與貯藏、運輸和市場方面的制約，龍眼產業(yè)經濟效益的提升受到制約。有必要從加強龍眼有效活性成分的研究，探索其活性成分與結構的關系，其生理或藥理機理等方面著手以提高龍眼龍眼生物利用度，從而實現一條開發(fā)龍眼藥用與保健深加工產品的科學道路。
　　 近年來，對龍眼功能性因子的研究越來越受到人們的關注，其中，龍眼多糖是龍眼中的一種生理活性物質，有抗氧化活性，免疫調控和改善記憶力的作用，以及抗腫瘤、抑制酪氨酸酶活性和糖基

3、化反應等生理功能。因此，龍眼多糖成為人們研究龍眼功能性因子的焦點之一。本課題以龍眼果肉為實驗材料，綜合應用食品科學、天然產物化學、食品化學等現代研究方法學理論和分析化學、儀器分析等現代研究技術手段，分離純化了龍眼多糖，并對該多糖的分子量、結構、流變特性以及清除自由基活性等進行研究。主要研究內容和結論概括如下:
　　 1、研究了龍眼多糖含量的測定方法，通過對傳統苯酚-硫酸法和兩種改進的苯酚-硫酸法測定龍眼多糖的精密度、重現性和回收

4、率進行比較分析后，結果顯示:三種方法的精密度都較好，其中，改良的苯酚-硫酸法的RSD是0.88％，比傳統法和定糖法分別小0.83％和1.24％;改良法和硫酸-苯酚定糖法的重現性較優(yōu)，RSD分別是3.16％和3.96％;三種方法的回收率沒有顯著差異。因此，本課題中采用改良苯酚-硫酸法測定龍眼中多糖含量，所測得龍眼多糖含量為14.64％。
　　 2、本文中以龍眼干果肉（濕基含水量12.94％）為材料，采用熱水浸提提取龍眼多糖，提取條

5、件為:溫度90℃，料液比1∶4，提取時間2h，提取次數3次。經Sevag法除蛋白，5次后已基本無殘留蛋白。用過氧化氫法除色后，龍眼多糖溶液從渾濁褐色變成了澄清的淡黃色溶液。經除蛋白、脫色、透析以及濃縮凍干后的龍眼多糖即是龍眼精制多糖LP，2.5Kg干龍眼肉可提取出精制多糖7.44g。接著，研究了龍眼多糖的純化工藝以及完成了純度鑒定和分子量測定工作。精制多糖LP經DEAE-纖維素52柱層析純化得三個組分LPA、LPB、LPC，得率分別是8

6、.35％，62.36％，11.36％。得率最高的LPB經Sephacryl S-400柱純化后得到多糖組分LPB-2-M，經過GPC鑒定后為均一純化多糖。同時，HPGPC法測得LPB-2-M重均分子量Mw為8.0×104g·moL-1，分子量的分布范圍在2.7×104 g·moL-1與4.1×105 g·moL-1之間，而分子量在8.4×104 g·moL-1以內的多糖占90％左右，分散系數D=1.03。
　　 3、通過一系列理

7、化性質實驗表明，龍眼粗多糖CLP呈褐色，部分水溶，精制龍眼多糖LP和純化龍眼多糖LPB-2-M均能完全溶于水，前者呈淡黃色蓬松狀，后者為無色粉末;茚三酮反應表明CLP中含有少量蛋白質，而LP和LPB-2-M中幾乎沒有殘留蛋白;硫酸-咔唑反應表明CLP、LP和LPB-2-M都含有糖醛酸;碘-碘化鉀反應表明龍眼多糖中不含淀粉類物質。熱分析顯示，龍眼多糖LPB-2-M具有兩次明顯的失重過程，第一個失重峰出現在70℃左右，失重率為10.85％，

8、第二個失重峰出現在226.7℃～276.5℃，失重率是38.77％，總體失重率是49.62％，說明龍眼多糖熱穩(wěn)定性良好，在230℃以下不易熱分解。
　　 4.初步研究了龍眼多糖流變類型以及濃度、pH、蔗糖、Na+和Ca2+的添加對其流變性的影響。通過穩(wěn)態(tài)剪切實驗和小振幅動態(tài)剪切實驗結果表明:龍眼多糖溶液有剪切稀釋現象，是非牛頓流體（亦稱假塑性流體）;龍眼多糖溶液濃度大于3％時，主要呈現彈性行為;pH變化對其表觀粘度影響非常明顯，

9、尤其是在堿性中大大降低，且影響是不可逆的;蔗糖、Na+和Ca2+的添加對龍眼多糖溶液的表觀粘度增加和粘彈性行為的影響有促進作用，且與蔗糖和Ca2+的添加量有一定濃度依賴性;但蔗糖、Na+和Ca2+并不會改變流體的類型。結合分析穩(wěn)態(tài)剪切測試和小振幅動態(tài)剪切測試結果表明:龍眼多糖溶液不符合Cox-Merz規(guī)則。
　　 5.采用紫外-可見分光光度計、高效液相色譜、紅外光譜、核磁共振波譜、高碘酸氧化等手段初步分析了龍眼多糖LPB-2-M

10、的結構。經苯酚-硫酸法測定粗多糖CLP、精制多糖LP和LPB-2-M含糖量分別為35.26％，47.42％和84.32％;硫酸-咔唑法測得糖醛酸含量分別是0.17％，6.27％和7.61％;考馬斯亮藍法測得CLP中蛋白含量為2.1％，LP和LPB-2-M中幾乎沒有殘留蛋白。LPB-2-M單糖組成有核糖，鼠李糖，果糖，葡萄糖，阿拉伯糖，半乳糖，木糖以及半乳糖醛酸;異頭碳為β-型居多，α-型非常少，是含有1→6鍵型，也可能含有1→2，1→4