重金屬鎘免疫檢測(cè)方法的研究.pdf

1、隨著現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展，重金屬污染問(wèn)題日益嚴(yán)重，對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán)境造成了重大的影響。本文建立了一套用于監(jiān)測(cè)中藥中白芷和水樣品中的重金屬鎘殘留的快速檢測(cè)技術(shù)，包括酶聯(lián)免疫法(ELISA)和膠體金免疫層析測(cè)定法(CGIA)，作為批量樣品的篩選方法和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的便捷工具。
　　使用雙功能螯合劑1-(4-異硫氰酸芐基)-乙二胺四乙酸(ITCBE)螯合重金屬鎘并偶聯(lián)匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)，分別制得免疫原和包被抗原，免疫原

2、免疫新西蘭大耳白兔后，從兔子的血清中得到了針對(duì)重金屬鎘高特異性的多克隆抗體。
　　在優(yōu)化了包被抗原包被量、抗體稀釋倍數(shù)、離子強(qiáng)度、pH值和封閉液的基礎(chǔ)上，建立了重金屬鎘間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線(xiàn)，方法的靈敏度(IC50)為4.18μg/L，最低檢出限LOD(IC15)為0.38μg/L。除了與重金屬汞螯合物和鉻螯合物的交叉反應(yīng)分別為10.6％和1.8％外，與其他金屬螯合物的交叉反應(yīng)都小于03％。選取中藥白芷、自來(lái)水和河水樣品作

3、為研究對(duì)象，進(jìn)行了重金屬鎘在樣品中的添加回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明重金屬鎘的平均回收率在90.54％-115.36％，變異系數(shù)在1.35％-9.33％之間。為了進(jìn)一步驗(yàn)證ELISA方法的準(zhǔn)確性，本文使用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)法檢測(cè)樣品中重金屬鎘的含量。在中藥白芷樣品中兩種方法檢測(cè)結(jié)果的線(xiàn)性回歸方程為y=1.087x-0.029，R2為0.994。在水樣品中兩種方法檢測(cè)結(jié)果的線(xiàn)性回歸方程為y=0.987x-0.085，R2為0.98

4、6。以上結(jié)果表明本文建立的ELISA具有很高的準(zhǔn)確度和精確度，適用于中藥白芷和水樣品中重金屬鎘的殘留分析。
　　同時(shí)，以膠體金作為抗體標(biāo)記物，建立了免疫層析試紙條快速檢測(cè)方法。采用檸檬酸三鈉還原法制備粒徑為20nm膠體金，優(yōu)化好標(biāo)記抗體的最適pH值和最適抗體量后，制備了膠體金標(biāo)記的抗體并噴涂在玻璃纖維墊上作為結(jié)合釋放墊。包被抗原和羊抗兔二抗分別作為檢測(cè)帶和質(zhì)控帶被固定在硝酸纖維素膜(NC膜)上，最后組裝成條用于檢測(cè)。本文建立的試紙