再生障礙性貧血調節(jié)T細胞功能缺陷的分子機制研究.pdf

1、目的：
　　通過檢測再生障礙性貧血(aplastic anemia,AA)患者外周血調節(jié)性T細胞（Regulatory T cells,Treg）數量及膜表面分子、核內轉錄因子FOXP3表達，以及AA患者Treg細胞的轉化傾向，探討AA患者Treg細胞免疫抑制功能下降的原因及分子基礎。
　　方法：
　　實驗組為2014年5月-2015年1月之間就診于中國醫(yī)學科學院血液病醫(yī)院（血液學研究所）的AA患者共45例，男女比例5

2、:4（25男，20女）,中位年齡31（6-77）歲，其中非重型再生障礙性貧血（non-SAA）6例，重型再生障礙性貧血（SAA）25例，極重型再生障礙性貧血（VSAA）14例。應用流式細胞術（flow cytometry，FCM）檢測AA患者外周血Treg細胞比例、核內FOXP3及Treg細胞膜表面抗原的表達情況；應用PMA/Ionomycin法檢測AA患者外周血Treg細胞免疫可塑性。
　　應用SPSS17.0做統(tǒng)計學分析,單因

3、素方差分析（one-way ANOVA）比較組間差異，P<0.05作為差異具有統(tǒng)計學意義，GraphPad Prime5作圖。
　　結果：
　　1. AA患者外周血Treg細胞比例下降，組間差異具有統(tǒng)計學意義。
　　2. AA患者Treg細胞膜表面標志CD39，CD73，PD-1陽性表達率升高，具有統(tǒng)計學意義。
　　3. AA患者功能性FOXP3+Treg膜表面抗原表達異常。
　　1) AA患者FOXP3+

4、Treg細胞中膜表面標記CD39，CD73，PD-1陽性表達率升高，具有統(tǒng)計學意義；而FOXP3-Treg細胞中CD39，CD73，PD-1陽性表達率升高，無統(tǒng)計學意義。
　　2) AA患者Treg細胞中CD28+FOXP3+Treg、TIGIT+FOXP3+Treg細胞比例下降，而CD39+FOXP3+Treg、CD73+FOXP3+Treg、PD-1+FOXP3+Treg細胞比例升高，以上均有統(tǒng)計學意義。CTLA-4+FOXP

5、3+Treg細胞比例下降，但無統(tǒng)計學差異。
　　4. AA患者FOXP3+Treg細胞抗原表達存在組間差異。
　　1)與健康對照組相比，除了non-SAA，AA患者SAA、VSAA兩亞群患者CD28+FOXP3+Treg細胞比例下降、CD39+FOXP3+Treg細胞比例升高，均有統(tǒng)計學意義；而AA患者組間無顯著統(tǒng)計學差異。
　　2)與健康對照組相比，VSAA亞群患者CD73+FOXP3+Treg升高具有統(tǒng)計學意義，n

6、on-SAA、SAA無統(tǒng)計學差異，AA患者組間無顯著統(tǒng)計學差異。
　　3) TIGIT+FOXP3+Treg、CTLA-4+FOXP3+Treg細胞比例在健康對照、non-SAA、SAA、VSAA各組間均無統(tǒng)計學差異，但仍可見AA患者TIGIT+FOXP3+Treg、CTLA-4+FOXP3+Treg比例下降趨勢。
　　5.經過PMA/Ionomycin方法刺激的AA患者Treg細胞胞內因子IFN-r表達量增加，IL-4因子

7、表達量下降，IL-17A因子表達量未見統(tǒng)計學差異。
　　結論：
　　1.AA患者Treg細胞比例下降，且與疾病嚴重性相關；FOXP3表達下降，Treg細胞免疫抑制功能缺陷。
　　2. AA患者Treg細胞膜表面受體表達異常，一定程度上參與AA患者免疫抑制功能缺陷。
　　3. AA患者功能性FOXP3+Treg膜表面標志表達異常是該人群Treg免疫抑制功能下降的原因之一。
　　4. AA患者Treg細胞IFN