利迪鏈霉菌對外源谷氨酸和脯氨酸的代謝響應研究.pdf

1、外源谷氨酸和脯氨酸的添加極大地促進了利迪鏈霉菌E9發(fā)酵中利迪鏈菌素的產(chǎn)量。本文通過考察外源氨基酸對利迪鏈霉菌代謝組和蛋白質組帶來的擾動,揭示了谷氨酸和脯氨酸促進利迪鏈菌素生產(chǎn)的機制,同時本文還對利迪鏈霉菌所產(chǎn)的抗真菌活性物質做了初步的定性研究。主要研究結果為:
　　1)利迪鏈霉菌發(fā)酵過程中,外源谷氨酸(100mg/L)和脯氨酸(100mg/L)的添加分別提高了56.8％和49.5%的利迪鏈菌素產(chǎn)量。通過GC-TOF MS對利迪鏈霉

2、菌添加外源氨基酸后不同發(fā)酵時期(12h,24h,72h)的胞內代謝物進行分析,總共對53種差異表達代謝物進行了定性定量考察。通過PCA分析發(fā)現(xiàn)影響利迪鏈菌素產(chǎn)量的7種潛在生物標志物有:纈氨酸,甘氨酸,丙氨酸,葡萄糖,正十六酸,硬脂酸,cAMP。
　　2)利用二維色譜結合飛行時間質譜(2D-LC-MS/MS)及同位素標記相對定量技術(iTRAQ)對添加谷氨酸和脯氨酸的利迪鏈霉菌發(fā)酵12h的胞內蛋白進行定量分析,共檢測到318種蛋白質

3、,對其中98種蛋白進行了定量分析。發(fā)現(xiàn)外源谷氨酸和脯氨酸的添加會導致蛋白水平顯著下降,尤其是谷氨酸的添加。這些差異表達的蛋白主要是參與核糖體結構蛋白、翻譯蛋白以及與利迪鏈菌素合成相關的氨基酸代謝和碳代謝相關的蛋白。
　　3)通過對利迪鏈霉菌所產(chǎn)的抗真菌活性物質的定性分析,發(fā)現(xiàn)此類活性物具有分解β-1,3葡聚糖的功能,同時通過簡單的濃縮離心步驟得到了該活性物質的初步分離產(chǎn)物,運用SDS-PAGE電泳分析初步確定其分子量約為2500D