環(huán)境雌激素對(duì)小鼠睪丸支持細(xì)胞的影響及分子機(jī)制的研究.pdf

1、環(huán)境雌激素又稱環(huán)境內(nèi)分泌干擾物質(zhì)(EDs)，是指一類存在環(huán)境中能干擾人或動(dòng)物體內(nèi)分泌系統(tǒng)并導(dǎo)致異常效應(yīng)的物質(zhì)。環(huán)境雌激素對(duì)人類生存環(huán)境的損害正在日益成為人類面臨的一個(gè)嚴(yán)峻問(wèn)題。環(huán)境雌激素能夠影響自然界生物包括人類的健康，導(dǎo)致各種疾病，它的影響是多方面的，其中對(duì)雄性生殖系統(tǒng)機(jī)能的危害最引人注目。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，EDs能夠影響雄性生殖系統(tǒng)的發(fā)育和功能，但其作用機(jī)制非常復(fù)雜，尤其在分子機(jī)制方面目前不甚了解，另外環(huán)境雌激素存在較多種類，它們之

2、間還具有協(xié)同作用，單獨(dú)檢測(cè)某一種環(huán)境雌激素活性可能會(huì)低估其潛在的危害性，這樣就更增加了其危害作用及機(jī)理的復(fù)雜性，因此有必要對(duì)一些常見(jiàn)的環(huán)境雌激素進(jìn)行混合性效應(yīng)研究。本實(shí)驗(yàn)采用組合酶消化、選擇性貼壁的方法，分離得到了高純度的小鼠睪丸支持細(xì)胞；在DMEM培養(yǎng)基中添加不同濃度(10-9，10-7，10-5mol/L)的雙酚A(BPA)、大豆異黃酮、BPA與大豆異黃酮的共同處理以及這兩種環(huán)境雌激素分別與睪酮的混合，作用體外培養(yǎng)的小鼠睪丸支持細(xì)胞

3、，然后用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞色素C(Cytochromec，cytC)和Bcl-2家族蛋白中Bax、Bcl-2的表達(dá)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示： 1.應(yīng)用組合酶消化、選擇性貼壁的方法，分離得到的小鼠睪丸支持細(xì)胞的純度達(dá)到90％以上。 2.激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)結(jié)果顯示：低濃度(10-9mol/L)的BPA或大豆異黃酮單獨(dú)處理組與對(duì)照組相比，細(xì)胞色素C的信號(hào)較強(qiáng)，Bcl-2家族蛋白中Bax的信號(hào)較弱、Bcl-2的信號(hào)較強(qiáng)；隨

4、著B(niǎo)PA或大豆異黃酮處理組劑量的升高(10-7，10-5mol/L)，細(xì)胞色素C的信號(hào)逐漸降低，Bcl-2家族蛋白中Bax的信號(hào)逐漸增強(qiáng)、Bcl-2的信號(hào)逐漸降低，說(shuō)明低濃度的BPA或大豆異黃酮對(duì)小鼠睪丸支持細(xì)胞可能具有促進(jìn)增殖的作用，高濃度可能促進(jìn)細(xì)胞凋亡。 3.與BPA或大豆異黃酮(10-9mol/L)單獨(dú)處理組相比，BPA與大豆異黃酮低濃度共同處理(10-9mol/L)小鼠睪丸支持細(xì)胞后，細(xì)胞色素C的信號(hào)較弱，Bcl-2

5、家族蛋白中Bax的信號(hào)較強(qiáng)、Bcl-2的信號(hào)較弱；而高劑量的共同處理組(10-5mol/L)與BPA、大豆異黃酮(10-5mol/L)單獨(dú)處理組相比，細(xì)胞色素C的信號(hào)明顯增強(qiáng)，Bcl-2家族蛋白中Bax的信號(hào)強(qiáng)度明顯減弱、Bcl-2的信號(hào)明顯增強(qiáng)，說(shuō)明低劑量的BPA與大豆異黃酮混合可能出現(xiàn)毒性疊加反應(yīng)，而在高劑量時(shí)可能發(fā)生拮抗現(xiàn)象。 4.BPA、大豆異黃酮分別與睪酮共同處理(10-5mol/L)與BPA、大豆異黃酮(10-5m

6、ol/L)單獨(dú)處理組相比，細(xì)胞色素C的信號(hào)明顯增強(qiáng)，Bcl-2家族蛋白中Bax的信號(hào)明顯減弱、Bcl-2的信號(hào)明顯增強(qiáng)，說(shuō)明這兩種環(huán)境雌激素與睪酮出現(xiàn)明顯的拮抗現(xiàn)象。 研究表明：BPA或大豆異黃酮單獨(dú)作用體外培養(yǎng)的小鼠睪丸支持細(xì)胞時(shí)，其作用機(jī)制可能相同；BPA與大豆異黃酮共同處理小鼠睪丸支持細(xì)胞，在低劑量時(shí)可能具有疊加作用，而在高劑量時(shí)則具有相互拮抗的效應(yīng)；EDs還可以通過(guò)拮抗雄激素發(fā)揮作用。這些激素對(duì)睪丸支持細(xì)胞的影響可能主