產(chǎn)硫酸軟骨素酶菌株的篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化及酶解產(chǎn)物分析.pdf

1、硫酸軟骨素酶（chondroitinase,ChSase),是一類主要存在于微生物體內(nèi)，能將多種酸性粘多糖如硫酸皮膚素、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸等降解為寡糖及不飽和二糖的裂解酶。該酶在研究機(jī)體內(nèi)硫酸軟骨素糖胺多糖的功能、結(jié)構(gòu)與分布方面、在治療動(dòng)脈粥樣硬化、關(guān)節(jié)炎等方面有著廣泛的應(yīng)用前景，同時(shí)，也用于制備低分子量硫酸軟骨素。低分子量硫酸軟骨素對(duì)防治風(fēng)濕性炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化方面相對(duì)于大分子量硫酸軟骨素有更好的療效。利用酶解法制備低分子量硫酸軟骨

2、素相對(duì)于目前廣泛采用的物理降解法、化學(xué)降解法不需要較高的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，也不會(huì)污染環(huán)境。因此，獲得大量的酶活力高的ChSase具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義,也是本實(shí)驗(yàn)的目的。因而本論文對(duì)產(chǎn)ChSase菌株的篩選、菌株產(chǎn)酶條件、菌株的鑒定、酶解產(chǎn)物等做了系統(tǒng)的研究。
　　在本實(shí)驗(yàn)中，利用平板快速篩選和復(fù)篩從土壤中篩選出一株高產(chǎn)ChSase菌株，編號(hào)為12，通過對(duì)其形態(tài)和16SrRNA基因序列的比對(duì)，將該菌株鑒定為節(jié)桿菌屬菌株（Arthroba

3、cter sp.），產(chǎn)酶方式為分泌型表達(dá)。
　　為了提高12號(hào)菌株的產(chǎn)酶水平，采用單次單因素實(shí)驗(yàn)方法對(duì)其碳源、氮源、無機(jī)鹽及各發(fā)酵條件進(jìn)行了研究，采用正交實(shí)驗(yàn)方法對(duì)碳源濃度、氮源濃度、無機(jī)鹽濃度及pH進(jìn)行了研究。得到的最佳培養(yǎng)基組分為（w/v）：硫酸軟骨素0.8％、KH2PO40.02%、酵母浸粉0.6%、MgSO4·7H200.8%、初始pH6；最適發(fā)酵條件為：按1.5%（v/v）接種量將種子菌液接入50ml/250ml的三角瓶