天然植物甾醇定向生物轉化制備甾體類藥物關鍵中間體的研究.pdf

1、甾體激素類藥物在制藥行業(yè)至關重要，在醫(yī)療領域的應用范圍不斷擴大，并已廣泛應用于臨床。甾體類化合物是一類含有環(huán)戊烷多氫菲核的化合物，在機體的生命活動和醫(yī)藥領域都占有重要地位，植物甾醇屬于甾體類化合物，其轉化產物雄烯二酮（AD）是生產甾體激素類藥物不可或缺的關鍵中間體。微生物轉化可以替代一些化學合成難以進行的反應，逐漸成為甾體激素類藥物生產的關鍵技術，通過微生物轉化甾體類化合物得到藥物關鍵中間體AD，再由其生產出有價值的甾體激素類化合物，已

2、成為現(xiàn)在研究的熱點。
　　本文通過海洋微生物的菌株篩選，獲得對植物甾醇進行定向生物轉化制備AD的菌株，并對其植物甾醇生物轉化制備AD的轉化工藝進行優(yōu)化，從而提高AD的轉化率。同時，對另一具有良好抗腫瘤活性的產物20-(羥甲基)孕-4-烯-3-酮進行微生物轉化初步研究。本文主要研究結果如下：
　　（1）利用來自中國東海海水的樣品，通過富集培養(yǎng)和植物甾醇寡培養(yǎng)基培養(yǎng)分離純化得到47株海洋微生物。結合實驗室已經(jīng)保藏的15株海洋微生

3、物，共62株海洋來源菌株，對植物甾醇進行微生物轉化。最終篩選得到一株具有植物甾醇定向生物轉化制備AD能力的海洋菌株，通過形態(tài)學、16S rDNA核酸序列和系統(tǒng)進化樹分析，確定為分枝桿菌Mycobacterium sp.zqc-12。
　?。?）對分枝桿菌zqc-12生物轉化植物甾醇制備AD工藝進行優(yōu)化，以AD轉化率為指標，通過單因素實驗和正交試驗，從培養(yǎng)基的組成和培養(yǎng)轉化條件兩方面來確定最佳工藝，最佳培養(yǎng)基組成：葡萄糖25g/L，

4、蛋白胨12g/L，磷酸氫二鈉0.7g/L，硫酸鎂0.5g/L，最佳培養(yǎng)轉化條件：初始pH7.5；培養(yǎng)溫度30℃，振蕩轉速180r/min，底物轉化時間72h，底物濃度1g/L，底物的處理方式為加助溶劑丙二醇。此條件下AD的轉化率為63.41％，比優(yōu)化前AD的轉化率提高了33.40%。
　?。?）對分枝桿菌zqc-12生物轉化植物甾醇生成20-(羥甲基)孕-4-烯-3-酮進行研究，通過紫外線誘變和亞硝酸誘變的復合誘變，篩選獲得一株正