噴司他丁生物合成的發(fā)酵優(yōu)化.pdf

1、噴司他丁是一種擬嘌呤類的抗生素，是一種高效的腺苷脫氨酶(Adenosine de-aminase，ADA)抑制劑，能夠與ADA緊密結(jié)合并抑制其活性，使腫瘤細(xì)胞內(nèi)大量積累脫氧腺苷三磷酸和脫氧腺苷，從而使DNA或RNA的合成受到抑制，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。噴司他丁主要用于毛細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、移植物抗宿主病及巨球蛋白血癥的治療。
　　目前，噴司他丁合成的方法主要有化學(xué)合成法和生物合成法。其中化學(xué)合成法合成路線復(fù)雜、原料成本

2、較高且得率較低:生物合成法的研究性文章較少，產(chǎn)率不高。為提高噴司他丁生物合成的產(chǎn)率，本文對噴司他丁的檢測方法和生物合成的發(fā)酵方法進(jìn)行了優(yōu)化。主要成果如下:
　　建立了噴司他丁的高效液相色譜定量檢測方法，色譜條件為:色譜柱AgilentEclipse XDB-C18柱(4.6×250 mm，5μm)，流動相為甲醇和10 mmol/L的乙酸銨溶液;檢測波長283 nm，進(jìn)樣量5μL，柱溫25℃，流速0.8 mL/min。在上述色譜條件

3、下，進(jìn)行了方法學(xué)考察，確定了Agilent1260的高效液相色譜儀檢測噴司他丁的檢出限為20.5μg/L;線性關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0833x-0.2939，R2=1;精密度和穩(wěn)定性的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值分別為0.10％和0.61％;加樣回收率為99.12％，RSD值為0.73％。利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對噴司他丁的高效液相色譜檢測方法進(jìn)行了驗證。
　　篩選確定了Streptomyces sp.ATCC39365液體深層發(fā)酵噴司他丁

4、的最適培養(yǎng)基。從40種碳源和氮源中篩選出最適合噴司他丁發(fā)酵的一種碳源和兩種氮源，確定了種子培養(yǎng)基(g/L):麥芽浸粉10，酵母浸粉4，葡萄糖4，(NH4)3PO42，裝液量280 mL/1000mL三角瓶，pH自然。于30℃、250 r/min搖床培養(yǎng)48 h得到液體種子。發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):麥芽浸粉30，酵母浸粉12，葡萄糖4，裝液量5L（7L發(fā)酵罐），接種前用30％ KOH將發(fā)酵培養(yǎng)基pH調(diào)至7.0。
　　優(yōu)化了噴司他丁7L