腫瘤細胞及端粒酶檢測的生物傳感技術(shù)新方法的研究.pdf

1、各種疾病已經(jīng)嚴重威脅到了人類的健康，而隨著人類生存環(huán)境的惡化，腫瘤更是目前奪取人們性命的一大殺手。腫瘤的發(fā)生嚴重影響著人們的生活質(zhì)量，危及著人們的生命安全，實現(xiàn)腫瘤細胞的準確、快速、簡便檢測，對于疾病的確診與治療具有非常重要的意義。端粒酶則是各種惡性腫瘤細胞一個共同的分子標志物，對端粒酶活性的檢測于癌癥的早期發(fā)現(xiàn)、發(fā)展和預后都有重大意義。本論文結(jié)合了近年來出現(xiàn)的一些新的傳感識別元件，利用電化學、光化學檢測方法研究了對腫瘤細胞及端粒酶活性

2、的檢測。
　　1.本章我們利用細胞核酸適體以及生物催化銀沉積信號放大方法建立了一種檢測腫瘤細胞-人B淋巴細胞瘤(Ramos細胞)的電化生物傳感器。首先我們利用巰基修飾的細胞核酸適體在金電極上捕獲細胞，通過Ramos細胞與另一條生物素標記的核酸適體的特異性結(jié)合作用，形成了核酸適體-細胞-核酸適體的夾心復合物。然后通過核酸適體上標記的生物素與鏈酶親和素標記的堿性磷酸酶(ALP)作用，ALP催化抗壞血酸磷酸脂形成的抗壞血酸還原Ag+成金

3、屬單質(zhì)Ag沉積在電極表面，采用線性掃描伏安法(LSV)檢測Ag的電化學信號，實現(xiàn)對Ramos細胞的放大檢測。結(jié)果表明，檢測Ramos細胞的線性關(guān)系范圍是10-106cells，檢測到的細胞最小濃度為10 cells，說明其具有很好的檢測靈度。該方法低的檢測限歸結(jié)于生物催化銀沉積的放大作用。
　　2.本章是基于端粒酶擴增反應(yīng)以及目標物誘導DNA鏈結(jié)構(gòu)變換的方法建立的一種用于檢測端粒酶活性的電化學生物傳感器。巰基修飾的端粒酶(TS)引

4、物鏈組裝在金電極上，二茂鐵標記的短鏈DNA與之雜交，由于二茂鐵接近電極表面而發(fā)生高效的電子傳遞。在端粒酶和混合核苷酸(dNTPs)的存在下，TS引物鏈開始擴增重復序列TTAGGG，而擴增的重復序列與雜交區(qū)域的堿基互補，可以雜交形成雙鏈，致使折疊成“發(fā)卡”結(jié)構(gòu)，二茂鐵標記的DNA短鏈則從電極表面釋放下來，氧化還原峰電流信號減小。通過氧化還原峰電流信號實現(xiàn)對端粒酶活性的檢測。此方法的檢測范圍是100-60000cells，檢測到的細胞最小濃

5、度為100 cells。該方法對端粒酶活性的檢測具有靈敏度高、操作簡單和背景信號低，不易出現(xiàn)假陰性結(jié)果等優(yōu)點。
　　3.本章是基于端粒酶擴增反應(yīng)，目標物誘導DNA鏈結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換以及納米金信號放大的方法建立了一種熒光生物傳感器用于端粒酶活性的檢測。巰基探針和熒光探針先退火雜交，然后將雜交雙鏈通標記在納米金顆粒上，這樣拉近了納米金與熒光基團FAM之間的距離，由于納米金的猝滅作用，致使FAM的熒光強度大大降低。在端粒酶和混合核苷酸(dNTP