促紅細胞生成素治療大鼠脊髓損傷劑量一效應關系的研究.pdf

1、目的：建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，并于硬膜下腔給予重組人促紅細胞生成素(rh-EPO)，研究rh-EPO對大鼠脊髓損傷后運動功能恢復、病理改變及神經細胞凋亡的影響，探討rh-EPO治療脊髓損傷的治療效果、最佳治療劑量及二者之間的關系，為臨床治療急性脊髓損傷提供實驗依據(jù)。
　　 方法：⑴脊髓半橫斷損傷模型：在顯微鏡下，應用顯微刀片對大鼠T10脊髓行右側半橫斷損傷，并于硬膜下腔放置自制注射管。⑵將80只成年雄性Wistar大鼠隨機分

2、為5組(n=16)，即假手術組、NS對照組、小劑量EPO治療組、中劑量EPO治療組、大劑量EPO治療組，除假手術組外其余均行脊髓半橫斷損傷。其中假手術組僅行椎板去除，不予藥物治療；NS對照組按照不同給藥時間點(術后30min內、術后1d、術后3d、術后7d)于硬膜下腔置管內緩慢注射生理鹽水，每次50μl；小、中、大劑量EPO治療組按上述給藥時間點于硬膜下腔置管內給予rh-EPO。每次給藥時，分別將100IU/kg、500IU/kg、10

3、00IU/kg rh-EPO加枸櫞酸納緩沖液至50μl后，相應緩慢地注入小、中、大劑量EPO治療組大鼠硬膜下腔。各組大鼠均于術后14d處死。⑶所有大鼠均于傷前、傷后定期進行BBB行為學評分，連續(xù)觀察2w脊髓損傷大鼠后肢運動功能恢復情況。大鼠處死后，損傷脊髓組織經石蠟包埋切片，采用HE染色觀察其病理改變，并應用原位缺口末端標記法(TUNEL法)標記損傷組織凋亡細胞，在光鏡下統(tǒng)計并分析結果，計算凋亡指數(shù)(ApoptoticIndex，AI)

4、。采用t檢驗(Student's t-test)比較兩組數(shù)據(jù)之間的差異性，用方差分析(analysis of variance，ANOVA)比較多組數(shù)據(jù)間的差異性，P<0.05即認為差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01即認為差異具有顯著統(tǒng)計學意義。
　　 結果：①大鼠脊髓半橫斷損傷模型成功穩(wěn)定，重復性好，且傷口整齊，損傷程度恒定，解剖定位準確，功能障礙亦確定。②BBB評分結果顯示：與術后1d相比較，各治療組術后3d、7d及14d的BB

5、B評分明顯增加(P<0.01)；小劑量EPO治療組較NS對照組BBB評分增加(P<0.05)；中、大劑量EPO治療組與NS對照組及小劑量EPO組相比較，BBB評分增加明顯(P<0.01)；中、大劑量EPO治療組之間比較，BBB評分無明顯改變(P>0.05)。③HE染色顯示：假手術組大鼠脊髓組織結構正常，神經元形態(tài)完好，尼氏小體清晰可見，外周白質區(qū)軸突正常；損傷組表現(xiàn)為脊髓組織水腫、彌漫性出血，囊腔及空泡形成，神經元變性乃至消失，尼氏小體

6、分辨不清，周圍大量炎癥細胞浸潤，星形膠質細胞大量增生，膠質癱痕形成，軸索退變，軸索與髓鞘之間空隙加大；EPO治療組創(chuàng)傷病理表現(xiàn)較NS對照組輕；中、大劑量EPO組較小劑量組輕。④凋亡細胞檢測結果顯示：假手術組偶見陽性細胞；損傷組白質中及空洞周邊可見大量陽性細胞表達。與NS對照組相比較，小劑量EPO組的凋亡細胞數(shù)及AI降低(P<0.05)；中、大劑量EPO組明顯低于NS對照組及小劑量EPO組(P<0.01)；中、大劑量EPO組之間比較，凋亡

7、細胞數(shù)及AI無明顯差異(P>0.05)。⑤相關性分析顯示：BBB評分有隨凋亡細胞數(shù)目減少而增加的趨勢，二者呈負相關。
　　 結論：⑴大鼠脊髓半橫斷損傷模型適于進行脊髓損傷的基礎理論研究和神經生物學觀察。⑵rh-EPO有助于脊髓損傷大鼠BBB運動功能評分的增加，促進大鼠運動功能恢復。⑶rh-EPO能改善大鼠脊髓損傷組織的病理改變。⑷rh-EPO能減輕大鼠脊髓損傷后神經細胞凋亡，降低凋亡指數(shù)。⑸BBB評分有隨凋亡細胞數(shù)目減少而增加的