羊血超氧化物歧化酶(SOD)的分離純化及化學(xué)修飾研究.pdf

1、超氧化物歧化酶(superoxide disuutase，SOD)能夠催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)生成過(guò)氧化氫和氧，隨后在過(guò)氧化氫酶的催化下，將過(guò)氧化氫分解為水和氧。
　　 SOD制劑在醫(yī)療、食品和化妝品領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。通過(guò)化學(xué)修飾的方法改變SOD的結(jié)構(gòu)，使其穩(wěn)定性得到加強(qiáng)才能實(shí)現(xiàn)擴(kuò)大應(yīng)用范圍的目的。內(nèi)蒙古有著豐富的畜產(chǎn)資源，全區(qū)每年羊的屠宰量達(dá)到1.5億只，大量的羊血資源未被充分利用。羊血當(dāng)中含有豐富的SOD，本研究用

2、新鮮羊血為實(shí)驗(yàn)材料，采用用有機(jī)溶劑變性去除雜蛋白，首先得到SOD粗制品，同時(shí)摸索關(guān)鍵提取條件(最佳銅離子濃度和變性溫度)，然后采用柱層析技術(shù)進(jìn)行純化得到SOD純品，利用NBT-活性染色法蛋白染色鑒定SOD，鄰苯三酚法測(cè)定SOD的活性，同時(shí)對(duì)其進(jìn)行光譜掃描和H2O2敏感性實(shí)驗(yàn)等性質(zhì)分析。選用聚乙二醇(PEG-6000)、牛血白蛋白、月桂酸分別對(duì)羊血SOD進(jìn)行化學(xué)修飾，得到三種SOD修飾酶。最后對(duì)修飾SOD作氨基酸組成分析、修飾率測(cè)定，熱穩(wěn)

3、定性研究和抗酶解研究。研究結(jié)論如下：
　　 1、1000ml羊血中得到SOD干粉1257mg，總活力為79453U，比活力為：3871．4U／ml。理化性質(zhì)分析表明該酶的最大紫外吸收波長(zhǎng)為2621m，對(duì)H2O2敏感。通過(guò)非變性凝膠電泳NHT活性染色和SOS-聚丙烯酰胺電泳，結(jié)果證明羊血SOD有兩條帶，SOD亞基分子量分別為16．71KDa，15 97KDa。
　　 2、經(jīng)過(guò)三種試劑月桂酸、牛血清白蛋白、PEG-6000修

4、飾SOD，通過(guò)活性測(cè)定以及SDS-PAGE，證明修飾后SOD仍然具有活性，并且分子量發(fā)生了改變。三種修飾SOD的修飾率分別是84．2％(月桂酸)，71.8％(PBG-6000)、44．7％(牛血清白蛋白)。三種修飾SOD所得剩余酶活力分別是2943.7U/ml(月桂酸)、2791.5 U/ml(牛血清白蛋白)、2379．4U／ml(PEG-6000)，月桂酸修飾后酶活保持率達(dá)到了89．6％、牛血清白蛋白修飾后酶活保持率為84．8％、PB