蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量測(cè)定方法研究.pdf

1、本文采用多種現(xiàn)代分離技術(shù)對(duì)雞蛋清中的溶菌酶進(jìn)行了提取分離，比較了不同方法對(duì)分離效果的影響；并利用新興的共振瑞利散射技術(shù)建立了溶菌酶的快速檢測(cè)方法；另外對(duì)溶菌酶酶學(xué)性質(zhì)及其體外抑菌活性進(jìn)行了初步探討。主要研究結(jié)果如下：
　　 采用離子交換法提取雞蛋清溶菌酶，考察了離子交換樹脂種類、用量、吸附反應(yīng)時(shí)間、洗脫液濃度和洗脫時(shí)間等對(duì)溶菌酶提取效果的影響，采用三因素三水平正交響應(yīng)面組合設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對(duì)提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，建立了樹脂用量、吸附

2、時(shí)間、洗脫液濃度三個(gè)提取工藝參數(shù)間的數(shù)學(xué)模型Y=0.339667+0.041X1+0.038375X2-0.021375X3＋0.00925X1X2-0.00425X1X3-0.0105X2X3-0.051583X12-0.068833X22-0.039833X32，得到最佳的提取工藝條件為：樹脂用量占蛋清液體積的32％,吸附時(shí)間6.5h，硫酸銨洗脫液的質(zhì)量濃度為9.3％。在此條件下提取的溶菌酶得率為0.324％，酶活力為16300U/

3、mg。
　　 將離子交換法制得的溶菌酶粗品用超濾法除鹽，選擇截留分子量為10000的聚醚砜膜，跨膜壓力設(shè)為0.2MPa，攪拌速度為200r/min，研究了超濾除鹽過程中濃縮液體積、膜通量以及脫鹽率的關(guān)系，得出當(dāng)超濾至濃縮液體積為原始料液體積的10％左右時(shí)，脫鹽效果最好，可以除去90％以上的硫酸銨，此時(shí)溶菌酶得率為0.275％，酶活力為21500U/mg。
　　 此外，本實(shí)驗(yàn)還研究了超濾法直接從蛋清液中分離溶菌酶的工藝條件

4、，探討了跨膜壓力、攪拌速度、料液稀釋倍數(shù)及溶液pH值對(duì)膜通量和蛋白質(zhì)滲透率的影響，得到最佳的超濾條件：0.1mol/LNaCl溶液以1：1(v/v)的比例稀釋蛋清液，料液pH值6.5，跨膜壓力0.2MPa，攪拌速度200r/min，在此條件下分離雞蛋清中溶菌酶，得率為0.301％，酶活力為18200U/mg。
　　 以金納米粒子作探針，建立了共振瑞利散射光譜法定量測(cè)定溶菌酶的方法。研究了金納米-溶菌酶體系的共振瑞利散射（RRS）

5、光譜、非線性散射（SOS和FDS）光譜和吸收光譜特征，并探討了金納米粒子與溶菌酶反應(yīng)的最適宜條件，包括：溶液pH值、金納米粒子用量、試劑混合順序以及共存離子等，確定了反應(yīng)的最優(yōu)條件，結(jié)果表明共存離子對(duì)共振瑞利散射法測(cè)定溶菌酶的影響很小。本實(shí)驗(yàn)還初步探討了導(dǎo)致體系共振瑞利散射光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)的原因。該溶菌酶檢測(cè)方法靈敏度高，檢出限為30.1ng/mL，且具有較好的選擇性，應(yīng)用于合成樣品和新鮮雞蛋清樣品中溶菌酶含量的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。

6、>　　 溶菌酶的酶學(xué)特性研究表明：其最適反應(yīng)pH值約為6，最適反應(yīng)溫度為55℃；溶菌酶在pH值為6-7和溫度為20℃-60℃范圍內(nèi)，能較好的保持酶活，且溫度變化對(duì)酶活力影響很??；另外大部分金屬離子能與溶菌酶產(chǎn)生良好的配伍作用，對(duì)酶活力影響不大，其中Na+、Ca2+、Mn2+對(duì)溶菌酶有一定的激活作用；幾種表面活性劑都對(duì)溶菌酶活力有一定抑制作用，但抑制作用相對(duì)較弱。
　　 溶菌酶的體外抑菌實(shí)驗(yàn)表明：其對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌有很好的抑