PMB親和介質用于生物制品中內毒素去除的研究.pdf

1、生物制品大多是由革蘭氏陰性菌表達制備的，內毒素含量通常很高，為保證生物制品使用的安全性，必須加以去除。百日咳疫苗是由百日咳桿菌表達制備的，原料液中內毒素含量極高，經(jīng)過一步離子交換層析雖可去除其中95％以上的內毒素，但其殘留的內毒素含量仍然很高，必須設法去除。本文將合成的多粘菌素B(PMB)親和介質用于生物制品中內毒素的去除，探索了介質特性、溶液環(huán)境、蛋白質特性和操作條件對內毒素去除和蛋白質回收的影響規(guī)律，建立了高效的內毒素去除工藝。

2、r>　　 首先以瓊脂糖凝膠為基質，PMB為親和配基，合成了PMB QZTFF親和介質，考察了環(huán)氧活化試劑、偶聯(lián)反應pH值和偶聯(lián)反應中PMB的加入量對介質合成的影響，建立了間隔臂長度可調、配基密度可控的PMB親和介質合成方法。
　　 在此基礎上，將所制備的介質用于去除不同蛋白質溶液中的內毒素，并重點考察了介質特性、溶液環(huán)境、蛋白質特性和操作條件對內毒素去除和蛋白質回收的影響。結果表明配基密度、pH值、鹽濃度和蛋白質特性(等電點和

3、疏水性)對內毒素去除效果均有重要影響。pH通過改變各分子的帶電性質影響分子間的靜電作用，進而影響內毒素的去除和蛋白質的回收，鹽濃度的改變則會同時影響分子間的靜電作用和疏水作用，而蛋白質的等電點和疏水性是影響蛋白質回收的主要因素。在優(yōu)化的條件下，血紅蛋白、人血清白蛋白和溶菌酶的回收率分別達到87.2％、73.4％和97.3％，相應的內毒素去除率分別達到99.8％、97.9％和99.7％。
　　 在前述實驗的基礎上，進行百日咳疫苗中